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https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/20771
CARACTERIZAÇÃO MOLECULAR DE UMA NOVA PROTEÍNA TIROSINA QUINASE, SMFES, DE SCHISTOSOMA MANSONI.
Ribeiro, Fernanda Ludolf | Date Issued:
2005
Author
Advisor
Comittee Member
Affilliation
Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil.
Abstract in Portuguese
A identif
icação de moléculas sinalizadoras
e a elucidação
de processo
s de transdução
de sinal
de
Schistosoma
mansoni
são necessárias
para o entendi
mento da interação
hospedeiro-
parasito
e de proces
sos fisiológicos
do parasito.
Proteínas
tirosinas
quinase
(PTK
s) são
molécu
las importan
tes na comunica
ção intra e intercelu
lar, tendo
um papel
crucial
nos
mecan
ismos de transdução
de sinal.
Estas
proteínas
estão
envolvidas
nos processo
s de
desenvolvim
ento,
diferenciação
e comuni
cação
celular
entre
outros.
Uma
nova
PTKs foi
identificad
a em
S. mansoni
e nomeada,
SmFes.
SmFes
é um gene de cópia
única
e o seu
cDNA comple
to contém
uma ORF
de 3.780
pb. SmFes
exibe
característi
cas da família
Fes/Fps/Fer
das PTKs,
com assinaturas
de domín
io proteína
quinase,
SH2 e
coiled-
coil
característ
icos. SmFes
é o prime
iro gene da família Fes/Fp
s/Fer
identificado
em
S. mansoni.
Análise
filogenétic
a revelou
que SmFes
está relacionada
a proteínas
da família Fes/Fps/Fer,
agrupadas
mais próximas
às proteínas
ortólogas
de organismos
invertebrados.
O alinham
ento
entre
o cDNA de SmFes
e seqüências
genôm
icas depositadas
pelos
bancos
de dados
de
S.
mansoni
indicara
m a presença
de 17 introns,
alguns
demonstrados
experi
mentalmente.
Análises
parciais
de clones
de cDNA
indicara
m a inserção
de 9 pb na posição
3’ do exon 10,
formando
duas populações
de cDNA,
comprovadas
por RFLP.
A análise
da seqüência
genômic
a indicou
que existem
dois possíveis
sítios
de edição
do RNA na proximidad
e 5’ do
intron,
indicando
um evento
de edição
alternat
iva. A existência
de um alelo
contendo
uma
inserção
de 15 pb na seqüência
genômi
ca foi observada.
As amplif
icaçõ
es de diferentes
espécies
de
Schistosoma
com pares
de iniciador
es desenhados
para SmFes
indicara
m a
presença
de ortólogos
de SmFes
em várias
espécies
do gênero.
SmFes
é transcrita
em baixos
níveis
nas diversas
fases
de desenvolvi
mento do parasito,
com uma maior taxa de transcrição
em verm
es machos,
como
detectado
por PCR em tempo
real e
northern-
blot.
A expressão
da
proteína
SmFes
foi verificada
em esporocisto,
mirac
ídio, verme
adulto
e em nível
mais
elevado
em cercári
a. Uma proteína
recombinan
te de SmFes
foi expressa
para ser usada
em
experim
entos
de identif
icação de parceiros
de SmFes
em futuros
ensaios
de co-precipitaç
ão e
també
m em experim
entos
de duplo
híbrido.
Vários
possíveis
parceiros
de SmFes
foram
identificados
por análise
compu
tacion
al. A compre
ensão
de genes
envolvidos
nos
mecan
ismos de transdução
de sinal pode
fornecer
novas
estratégias
de desenvolvi
mento
de
drogas.
Abstract
The identifi
cation and elucida
tion of signal
transduction
molecules
and mechan
isms are
necessary
for the understanding
of the
Schistosoma
mansoni
host-parasite
interac
tion and of
physiologica
l process
of the parasite.
Protein
Tyrosine kinases
(PTKs)
are impor
tant
molecu
les for intra
and interce
llular comm
unication,
playing a crucial
role in signal
transduction
processes.
These
proteins
are known
to be involved
in developm
ental,
differentiat
ion and communication
processes
of cells,
among
others.
A novel
member of PTK
was identified
in
S. mansoni
and designated
SmFes.
SmFes
is a single
copy
gene and the
comple
te cDNA contains
a 3.780
bp ORF. SmFes
exhibits
the characteristi
c features
of
Fes/Fps/Fer
protein
tyrosine kinases
family, containing
three
coiled-
coil regions,
an SH2 and
a protein
tyrosine kinase catal
ytic doma
in signatures.
SmFes
is the first gene
from
Fes/Fps/Fer
family identified
in
S. mansoni.
Phylogene
tic analyses reveled
that SmFes
is more
closel
y
related
to invertebrate
proteins
orthologues
of the Fes/Fps/Fer
family. The assembly of the
SmFes
cDNA
and genomi
c sequences
indicated
the presence
of 17 introns,
some
experim
entally demonstra
ted. Analy
sis of partial
cDNA clones
indicated
the presence
of a 9
pb insertion
at the 3’ end of exon
10, producing
two different
populations
of cDNA. The
analysis of the genomi
c sequence
indicated
that there
are two possible
splice
sites at the 5’end
of the intron,
pointing
to an alternative
splicing
event
in the SmFes
pre-mRNA.
An allele
of
the SmFes
containing
a 15 pb insertion
was observed
in genomi
c sequence.
The amplification
of different
Schistosoma
species
with SmFes
specific
primers
indicat
ed that orthologues
of
SmFes
are present
in several
species
of the genus.
SmFes
is transcribed
at low levels
in the
different
develop
mental stages
of the parasite,
with higher
level
in adult
male worms
as
detected
by real time PCR and
northern-blot
. The expression
of SmFes protein
was verified
in
sporoc
yst, mirac
idium, adult
worm and in higher
levels
in cercariae.
A recombin
ant protein
was expressed
to be used in experi
ments to identif
y SmFes
partner
proteins
in future
pull-
down assay
s and also in two-h
ybrid systems. Various
possible
partners
or SmFes
were
identified
by computa
tional analy
sis. The comprehension
of signal
transduction
processes
could also
contribute
to the
identific
ation
of po
ssible
new targets
for drug
s.
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