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https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/7077
ONTOGENIA DO SISTEMA HEMATOPOÉTICO DE EMBRIÕES DE GALLUS GALLUS DOMESTICUS L.: A EXPANSÃO DA HEMATOPOESE NO SACO VITELÍNICO E SUA MIGRAÇÃO PARA O FÍGADO E PARA A MEDULA ÓSSEA
Guedes, Priscila Tavares | Data do documento:
2011
Autor(es)
Orientador
Membros da banca
Afiliação
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Resumo
O presente trabalho objetivou estudar aspectos morfológicos e funcionais do sistema
hematopoético em diferentes fases do desenvolvimento embrionário de Gallus gallus domesticus L.
Ovos embrionados foram incubados entre 26 horas a 21 dias de desenvolvimento (dd). Embriões e
seus anexos foram coletados diariamente e blocos histológicos foram produzidos. Seções de cada
bloco foram coradas pelas técnicas HE, Giemsa de Lennert, Sirius Red pH 10,2 e PAS, analisando-se
o saco vitelínico, fígado e medula óssea. O saco vitelínico foi o único sítio hematopoético dentre 13 e
14dd. Dos 14 aos 20dd, a hematopoese ocorreu no saco vitelínico e na medula óssea. O fígado
mostrou diferenciação granulocítica no conjuntivo dos espaços portais a partir dos 15dd. As linhagens
eritrocítica e granulocítica se expandiram no saco vitelínico, respectivamente de 6 a 19dd e de 7 a
20dd. Na medula óssea, os granulócitos foram observados aos 10dd, seguindo o estabelecimento da
granulopoese no estroma aos 14dd e da eritropoese nos sinusóides aos 15dd. Aspectos topográficos
e morfológicos de sacos vitelínicos foram detalhados, associando macroscopia à microscopia.
Membranas vitelínicas de 12 e 14dd foram analisadas macroscopicamente, regionalizadas em áreas,
observadas ao microscópico estereoscópico e processadas. Os cortes foram corados em HE e
escaneados em digitalizador de lâminas. Macroscopicamente, as membranas vitelínicas possuem
três áreas concêntricas. A microscopia estereoscópica demonstrou uma cobertura translúcida nas
veias vitelínicas e que varia de translúcida a opaca nas artérias. Em ambos os vasos, essa cobertura
é o endoderma. Eritropoese e granulopoese ocorreram nas adjacências das artérias e nas três
regiões. Em membranas vitelínicas de diferentes estádios, as colorações PAS, PAS-AB (pH 2,5 e
1,0), picrosirius, resorcina fucsina de Weigert e reticulina de Gomori foram realizadas, além de
imunohistologia para diferentes anticorpos. Observou-se positividade para alfa-actina de músculo liso
na vasculatura vitelínica e expressão para a fibronectina no entorno dos vasos e na matriz
extracelular durante o desenvolvimento. Análises tomográficas à microscópia confocal de membranas
vitelínicas coradas com berberina e laranja de acridina demonstraram a presença de ramos arteriais.
Focos de granulopoese se dispuseram numa matriz constituída por glicoproteínas,
glicosaminoglicanos, fibras reticulares e fibronectina. A eritropoese ocorre nos ramos arteriais,
delimitados pelas moléculas supracitadas, fibras colágenas e elásticas. A concentração e localização
das fibras reticulares variaram de acordo com o desenvolvimento, sendo presentes entre artérias,
seus ramos e endoderma; entre endoderma e veias. Células endodérmicas, eritroblastos e
granulócítos em diferenciação expressaram VEGF. Eritroblastos foram VEGF-C positivos e a
expressão de VEGFR-3 mostrou-se presente em vasos de pequeno calibre. Em conclusão, o
presente estudo sugere que: 1- o saco vitelínico é o principal sítio de expansão no Gallus gallus sp.;
2- a hematopoese hepática é restrita à granulopoese, aos espaços porta e quando a medula óssea é
funcional; 3- a eritropoese no saco vitelínico e medula óssea do Gallus gallus sp. está associada ao
endotélio e à granulopoese, ao estroma; 4- as fibras reticulares no saco vitelínico desempenham
funções de sustentação, na granulopoese e participam da morfogênese deste anexo; 5- células
endodérmicas e hematopoéticas modulam a angiogênese no saco vitelínico.
Resumo em Inglês
The present work aimed to study morphological and functional aspects about hematopoietic system
ontogeny during chicken development. Embryonic eggs of Gallus gallus domesticus L. were incubated
from 26 hours to 21 days of development (dd). The embryos and their extra-embryonic structures were
collected daily and embedded in paraffin. Sections of each specimen were stained by hematoxilineosin,
Lennert’s Giemsa, Sirius Red pH10.2 and PAS. Afterwards, yolk sac, liver and bone marrow
were analyzed. Yolk sac was the unique hematopoietic site from 4dd to 13dd. From 14dd to 20dd,
hematopoiesis occurred in yolk sac and bone marrow. The liver showed granulocytic differentiation in
connective tissue of portal spaces during 15dd onwards. Yolk sac expanded erythrocytic and
granulocytic lineages from 6dd to 19dd and 7dd to 20dd respectively. In bone marrow, granulocytes
were verified from 10dd. During 14dd, granulopoiesis began to establish in stroma and erythropoiesis
showed into vessels from 15dd onwards. Yolk sac topographic and morphological aspects were
detailed, including macroscopic and microscopic relationship. Yolk membranes of 12dd and 14dd were
macroscopically analyzed, mapped in areas, observed in stereoscopic microscope and processed to
histology. The sections were stained by hematoxylin-eosin and scanned. Macroscopically, three
concentric areas were observed in yolk membranes. The stereoscopic microscopy showed a
translucent structure involving arteries and veins, which it also can be opaque in arteries. In both
vessels, this structure is the endoderm. Erythropoiesis and granulopoiesis occurred in the proximities
of arteries. Yolk membrane of different stages were stained by PAS, PAS-AB (pHs 2.5 e 1.0), sirius
red, Weigert’s resorcin fucsin, Gomori’s reticulin techniques and submitted by imunohistology. During
development, yolk vessels expressed alfa-smooth muscle actin. Patches of fibronectin were seen
located in both turn of the vessels and in the extracellular matrix. Tomographic analysis by confocal
microscopy of yolk membranes, stained by berberin and orange acridin, showed the presence of
artery branches. Granulopoiesis foci were located in extracellular matrix composed by glycoproteins,
glycosaminoglycans, reticular fibers and fibronectin. Erythropoiesis foci were noted into lumen of
artery branches, limited by those extracellular matrix besides to collagen and elastic fibers. The
concentration and location of reticular fibers changed according to period of development. These
fibers were located between arteries, their branches and endoderm; between endoderm and veins.
VEGF was expressed in endodermic cells, erythroblasts and granulocytes in differentiation. Also,
erythroblasts expressed VEGF-C and small yolk vessels revealed VEGF-R3 expression. In
conclusion, the present study suggest that: 1- yolk sac is the major hematopoietic site during chicken
development; 2- hepatic hematopoiesis is restrict to the portal spaces; it is represented by granulocytic
lineage and when bone marrow acquire functionality; 3- erythropoiesis in chicken yolk sac and bone
marrow is related to endothelium while granulopoiesis associated to stroma; 4- reticular fibers in yolk
sac participate in its structural maintenance, in the granulopoiesis and its morphogenesis; 5-
endodermic cells and hematopoietic cells modulate the angiogenesis in the yolk sac.
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