Activation of Leishmania spp. leishporin: Evidence that dissociation of an inhibitor not only improves its lipid-binding efficiency but also endows it with the ability to form pores

Abstract

Mostramos anteriormente que várias espécies de Leishmania produzem uma atividade lítica, que, em Leishmania amazonensis, é mediada por uma citolisina formadora de poros, chamada leishporina. Ela é tóxica para macrófagos in vitro e otimamente ativa em pH 5,0 a 5,5 e a 37 °C, sugerindo que pode ser ativa dentro de fagolisossomos. A leishporina de L. amazonensis (a-leishporina) e Leishmania guyanensis (g-leishporina) pode ser ativada por proteases, sugerindo uma proteólise limitada de um precursor inativo ou uma degradação proteolítica de um inibidor não covalentemente ligado. Aqui, mostramos que tanto a a quanto a g-leishporina também são ativadas em condições de dissociação, indicando a segunda hipótese como a correta. De fato, demonstramos ainda que a leishporina inativa é associada de forma não covalente a um inibidor, possivelmente mais de um oligopeptídeo que, quando removido, torna a leishporina hemoliticamente ativa. Essa ativação demonstrou ser o resultado tanto da melhora da capacidade da leishporina de se ligar a fosfolipídios quanto do surgimento de sua capacidade de formação de poros. Os resultados in vitro demonstram que a leishporina pode ser liberada pelos parasitas, à medida que evoluem em culturas axênicas, em uma forma inativa que pode ser ativada. Esses resultados são compatíveis com nossa hipótese de que a leishporina pode ser ativada no ambiente rico em protease, de baixo pH e dissociação de vacúolos parasitóforos, levando à ruptura de vacúolos e membranas plasmáticas com a liberação de amastigotas.