Detecção de Schistosoma mansoni Sambon, 1907 (Trematoda: Digenea) por metodologias de amplificação isotérmica (LAMP e RPA) em amostras de humanos e moluscos do gênero Biomphalaria (Preston, 1910) (Mollusca: Gastropoda).

Abstract

A Organização Mundial de Saúde lançou em 2022 um conjunto de seis recomendações para eliminação da esquistossomose como problema de saúde pública até 2030 e a detecção de S. mansoni em seus hospedeiros está contemplada em cinco delas. Métodos moleculares baseados em amplificação isotérmica de DNA são abordagens acuradas e que necessitam de poucos recursos e equipamentos, cujos resultados são fáceis de interpretar. Esta tese avaliou o desempenho de LAMP (amplificação isotérmica mediada por loop) e RPA (amplificação da polimerase recombinase) como alternativas para a detecção de S. mansoni em amostras de humanos e de moluscos provenientes de áreas de endêmicas para esquistossomose em Minas Gerais. Um ensaio de LAMP previamente descrito foi otimizado para garantir a especificidade da reação, enquanto um novo ensaio de RPA em tempo real foi desenvolvido. Os ensaios foram nomeados como: SmMITalt-LAMP (amostras humanas), SmMITmol-LAMP (amostras de moluscos) e SmMIT-RPA (ambas as amostras). Para avaliar as medidas de acurácia dos testes em amostras humanas, foi desenvolvido em paralelo a esta tese um modelo de classe latente que definiu os indivíduos verdadeiro-positivos. Para avaliar o desempenho de ambas as abordagens em amostras de moluscos, seus resultados foram comparados aos resultados de métodos baseados em PCR e sequenciamento de nucleotídeos. Todos os protocolos apresentaram 100% de especificidade analítica, com limites inferiores de detecção variando de 0,1 ng (SmMITmol-LAMP) a 1 fg (SmMIT-RPA). SmMITalt-LAMP em amostras de fezes apresentou sensibilidade de 72% e especificidade de 75%, enquanto em amostras de urina os valores estimados foram de 19% e 77%, respectivamente. SmMIT-RPA em amostras de fezes apresentou sensibilidade de 67% e especificidade de 99%. Em moluscos oriundos do campo observou-se a presença de S. mansoni em 33,3% dos pontos de coleta por SmMITmol-LAMP, enquanto por SmMIT-RPA a taxa de positividade foi de 55,5% dos locais, sendo, respectivamente, três e cinco vezes mais sensíveis que a técnica parasitológica tradicional. Os resultados deste estudo confirmam que LAMP e RPA são metodologias moleculares promissoras. Ambas geraram resultados satisfatórios em termos de sensibilidade analítica e especificidade quando utilizadas amostras de laboratório e de moluscos coletados em campo, entretanto, para utilização em amostras de humanos, SmMITalt-LAMP e SmMIT-RPA demandam futuras otimizações nas reações e/ou na fase pré-analítica de amostras.