Análise do efeito da ativação dos receptores tipo Toll 2 (TLR-2) sobre a replicação do HIV-1 em células primárias humanas

Abstract

Pacientes infectados pelo HIV-1 apresentam aumentada permeabilidade intestinal, a qual permite a passagem para a circulação sanguínea de produtos microbianos, fenômeno conhecido por translocação microbiana. Dentre os produtos translocados são encontrados vários ligantes dos receptores do tipo Toll (TRL). A ativação de TLR desencadeia uma complexa cascata de sinalização, induz a síntese de diversas citocinas, e modula a função de células dendríticas (CDs), macrófagos e linfócitos, células-alvo da infecção pelo HIV-1. Estudos experimentais mostram que a ativação de TLRs influencia a replicação do HIV-1, como, por exemplo, a ativação de TLR-4 e TLR-3 resulta em diminuição da replicação viral. No entanto, os estudos relacionados à ativação de TLR-2 e HIV-1 são escassos. Assim, em nosso estudo, resolvemos analisar o efeito da ativação de TLR-2 sobre a replicação do HIV-1 em PBMCs e macrófagos primários humanos infectados in vitro. Para isto, PBMCs e macrófagos obtidos de doadores saudáveis foram infectados pelo HIV-1 e em seguida expostos ao Zymosaqn ou Pam3CSK4, ambos ligantes de TLR-2, e a replicação viral foi avaliada pela detecção da proteína viral p24 nos sobredanantes de cultura. Vimos que tanto o Zymosan quanto o Pam3CSK4 inibem de forma potente (até 90%) a replicação do isolado Ba-L (trópico para CCR5) de HIV-1 em PBMCs e macrófagos, assim como isolados primários trópicos para CCR5 e CXCR4. o tratamento das células com os ligantes de TLR-2 antes da infecção também induziu a queda da replicação viral. Ambos os ligantes de TLR-2 induziram aumento da produção das β-quimiocinas CCL3, CCL4 e CCL5 em macrófagos e PBMCs, e de IL-10 em macrófagos. A imuno-neutralização das β-quimiocinas diminuiu expressivamente o seu efeito inibitório sobre a replicação do HIV-1, sugerindo que estas moléculas participam da inibição da replicação do HIV-1 resultante da ativação de TLR2. no entanto, a neutralização do receptor de IL-10 não produziu resultados semelhantes. A expressão dos receptores celulares CD4, CCR5 e CXCR4 não foi alterada quando macrófagos e PBMCs foram tratados com Pam3CSK4. observamos, ainda, que a proteína quinase R (PKR) é ativada por Pam3CSK4 tanto em macrófagos quanto em PBMCs. Estes resultados mostram que a ativação de TLR-2 resulta em uma potente inibição da replicação do HIV-1 em PBMCs e macrófagos, e sugerem que as β-quimiocinas estão envolvidas neste fenômeno. Nossos achados ressaltam o papel anti-HIV-1 resultante da ativação de TLR-2, e indicam que novos estudos devem ser realizados para esclarecer, com maior profundidade, os mecanismos envolvidos neste processo.