Co-expressão dos genes do fator IX e das enzimas PACE, gama-carboxilase e VKORC1 em células CHO

Abstract

Neste trabalho o gene do fator IX, proteína utilizada no tratamento da hemofilia B, foi co-expresso com os genes das enzimas γ-carboxilase, VKORC1 e PACE, responsáveis pelas modificações pós-tradução da molécula do fator IX, em células CHO. Estas modificações são imprescindíveis para a atividade biológica do fator IX. Foram construídos vetores bicistrônicos com o elemento IRES defectivo intermediando os dois genes, com os cDNAs do fator IX e das enzimas. A expressão gênica, a produção do fator IX total e a atividade do fator IX foram avaliadas em células CHO transfectadas com o vetor pIRES, de integração aleatória, e com o vetor pcDNA5/FRT, de integração sítio-dirigida. O nível de expressão e produção de fator IX em células transfectadas com o vetor pIRES foi baixo em relação ao obtido para o pcDNA5/FRT. Isto comprovou a superioridade do sistema de integração sítio-dirigida em relação à integração aleatória. Como a expressão utilizando o vetor pIRES foi baixa, praticamente não houve influência da co-expressão das enzimas. Já com o pCDNA5/FRT, a coexpressão da γ-carboxilase prejudicou a produção de fator IX funcional, provavelmente pela reduzida oferta de co-fator desta enzima, a vitamina K reduzida.