Desenvolvimento de ELISA para controle da qualidade de soro antirrábico

Abstract

Os produtos disponíveis no mercado para a profilaxia da Raiva, como as vacinas e imunoglobulinas, precisam ser analisados por ensaios de controle da qualidade para averiguar a conformidade com o padrão determinado pela Farmacopeia Brasileira. Esta zoonose viral está incluída entre as doenças tropicais negligenciadas com alto índice de letalidade (99,9%). No que diz respeito ao soro antirrábico heterólogo equino, realiza-se o ensaio de potência baseado na capacidade de neutralização viral. Embora o ensaio em cultivo celular (Rapid Fluorescent Focus Inhibition Test - RFFIT) seja indicado, testes in vivo ainda são empregados. Esses testes podem ser laboriosos, demorados, variáveis e requerem a manipulação de vírus viável. Com a implementação dos 3Rs (Replacement, Reduction, and Refinement), na utilização de animais de laboratório para fins científicos, a substituição por métodos in vitro tem sido cada vez mais estimulada. Dentre as técnicas com esse potencial, o Ensaio de Imunoabsorção Enzimática (ELISA) se destaca como alternativa para demonstrar a consistência de produção dos lotes fabricados. O objetivo deste trabalho é desenvolver um ensaio ELISA indireto de titulação de soro antirrábico equino, para demonstrar a consistência de produção, visando a liberação deste produto, pelo laboratório nacional de controle da qualidade de imunobiológicos para a Raiva, do Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde (INCQS) da Fiocruz. Fundamentado em estudos de validação realizados internacionalmente, o ensaio consistirá na utilização da vacina de referência nacional como antígeno (BR014), de fragmentos F(ab’)2 altamente purificados de soro antirrábico equino e anticorpos antissoro equino conjugados para a detecção.