Verificação de método do ensaio de contagem de estafilococos coagulase positiva a partir de alimentos

Abstract

A verificação de método analítico se aplica quando o laboratório utiliza um método já validado para verificar se as condições do laboratório, isto é, insumos, equipamentos e pessoal, são capazes de reproduzir adequadamente a metodologia. A verificação é uma exigência da ABNT NBR ISO 17025:2017 que é o sistema da qualidade mais utilizado em laboratórios de ensaio. O objetivo do presente trabalho é realizar a verificação do ensaio de contagem de estafilococos coagulase positiva por plaqueamento direto em amostra de alimentos, que é um ensaio quantitativo descrito no POP 65.3240.002 (Contagem de Estafilocos Coagulase Positiva a Partir de Alimentos e Identificação de Staphylococcus aureus). O referido POP é baseado na metodologia descrita na Norma ISO 6888-1:2021 (Método horizontal para a enumeração de estafilococos coagulase positiva – Método utilizando o meio ágar Baird-Parker). A avaliação de desempenho será desenvolvida com base no DOQ-CGCRE-089 – Revisão 00 (Orientação sobre Avaliação de Desempenho de Métodos Analíticos – Microbiologia) e para métodos, quantitativos, os parâmetros avaliados são repetibilidade e reprodutibilidade. Será elaborado um protocolo com todas as etapas da verificação. O alimento utilizado será o leite desnatado estéril que será contaminado artificialmente com quantidades conhecidas de micro-organismos de referência certificados (MRC) de Staphylococcus aureus MRC ATCC 25923 e Pseudomonas aeruginosa MRC ATCC 27853 como interferente. O método consiste na contagem de estafilococos coagulase positiva utilizando a técnica de semeadura em superfície, em duplicata, em meio ágar Baird Parker com gema de ovo e solução de telurito de potássio a 3,5%. Para a repetibilidade, serão analisadas 10 amostras de leite desnatado (skim milk) de mesmo lote, pelo mesmo analista, nas mesmas condições em curto período. Para a reprodutibilidade, serão analisadas 20 amostras de leite desnatado de mesmo lote, dez para cada analista, utilizando o mesmo lote de meio de cultura, diluente, vidrarias e mesmos equipamentos. Os resultados serão comparados com os parâmetros descritos na ISO 6888-1:2021. Segundo a ISO 6888- 1:2021, o limite de repetibilidade (r) é dado pela diferença em log10 dos valores das contagens de unidades formadoras de colônias (UFC) encontradas, e não deve ser superior a 0,28 em 95% dos casos analisados na validação do método. Para o limite de reprodutibilidade (R) esse valor não deve ser superior a 0,43 em 95% dos casos analisados.