Expressão de tetraspanina co029 como biomarcador tumoral para preparação de anticorpos monoclonais: avaliação antigênica em células de câncer colorretal

Abstract

Introdução: A identificação de biomarcadores de câncer inovadores é uma busca contínua muito relevante. Além disso, seu papel no diagnóstico do câncer e no manejo clínico mudou radicalmente nos últimos anos, com grande ênfase na classificação molecular do câncer, na identificação do alvo t Western blotting erapêutico e na responsividade do protocolo terapêutico. As tetraspaninas são uma família de proteínas transmembrana correlacionadas com o estágio do tumor, tipo de tumor e evolução do paciente, que afetam o crescimento celular, morfologia, invasão e metástase. Métodos: Expressamos o antígeno de tetraspanina co029 humana transmembrana de 31kDa em células hospedeiras de expressão de Escherichia coli usando a plataforma Gateway®. As técnicas de Western blotting e ELISA, juntamente com o sequenciamento de genes, confirmaram a identidade da proteína recombinante TSP co029. Obtiveram-se quarenta clones produtores de anticorpos contra TSP co029. Esses anticorpos foram incubados com células de câncer colorretal humano em diferentes condições. ELISA e imunohistoquímica também foram realizados. Resultados: A tetraspanina expressa tinha uma conformação adequada e integridade antigênica para produzir anticorpos com afinidade para o biomarcador TSP co029 nativo. A afinidade da proteína recombinante purificada e dos anticorpos foram confirmados por western blotting, coloração fluorescente de células de câncer colorretal humano em microscopias fluorescentes e confocais, e por ELISA e imunohistoquímica. Conclusão: Nossos dados mostraram que a proteína recombinante e os anticorpos produzidos neste estudo permitiram a confirmação da proteína tetraspanina co029 apresentada na superfície de células de câncer colorretal humano.