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DissertaçãoDireito Autoral
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AVALIAÇÃO DA UTILIZAÇÃO DE MEMBRANAS TROCA-IÔNICA NA PURIFICAÇÃO DE ERITROPOETINA HUMANA RECOMBINANTE
Recombinant erythropoietin
biopharmaceuticals
Chromatography
Ion Exchange
Norte, Luciana Carreiras | Data do documento:
2007
Autor(es)
Orientador
Afiliação
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Resumo
Nesta avaliação, realizaram-se ensaios cromatográficos de purificação
de eritropoetina humana recombinante, a partir do sobrenadante de cultura de
células de mamíferos da linhagem CHO (células de ovário de hamster chinês),
produtoras deste biofármaco. Compararam-se as membranas comerciais de troca iônica Sartobind (MA) Q e D, com o objetivo de avaliar a sua aplicabilidade a processos de purificação de EPO.
Ambas as membranas apresentaram-se capazes de adsorver EPO nas condições avaliadas. EPO foi detectada nas amostrasde eluído de ambas as membranas, tendo-se verificado que o imunoensaio dotipo dot-blotfoi aquele
que forneceu as informações mais conclusivas. Já nas análises de eletroforese, verificou-se um perfil difuso das bandas do eluído das membranas, o que foi creditado à heterogeneidade glicídica da EPO, como anteriormente demonstrado na literatura.
Resumo em Inglês
In the present work, the purification of recombinant human erythropoietin (rhEPO) from CHO (Chinese hamster ovary) cell culture supernatant was investigated using anion-exchange chromatography. Commercial membrane adsorbers (Sartobind D and Q) were compared, with the aim of evaluating their
aplicability to EPO purification processes.
Both membranes were able to adsorb EPO under the conditions evaluated in this work. EPO was detected in the eluate of both membranes. The immunoassay dot-blot was the most interesting analytical tool, giving the most conclusive results. Electrophoretic analyses showeda diffuse band, probably
due to glycan heterogeneity in the EPO molecules, as previously reported in the
literature.
Palavras-chave em inglês
BiotechnologyRecombinant erythropoietin
biopharmaceuticals
Chromatography
Ion Exchange
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