Desenvolvimento de material de referência de Staphylococcus aureus para o controle de qualidade de ensaios em laboratório de microbiologia de alimentos

Abstract

O controle da qualidade em laboratórios de ensaios tem como objetivo a garantia da qualidade dos resultados. A NBR ISO/IEC 17025:2017 é a norma do sistema da qualidade mais utilizada em laboratórios e descreve os requisitos para obtenção de resultados precisos e confiáveis. Um desses requisitos é a utilização de materiais de referência (MR) como controle interno das análises. As bactérias de referência são obtidas de coleções, na maioria internacionais, porém o alto custo para aquisição e os requisitos para a importação dificultam a obtenção pelos laboratórios brasileiros. Portanto, destaca-se a importância do desenvolvimento de bactérias de referência nacionais, isoladas de alimentos, para serem utilizadas como controle interno em análises de alimentos. O objetivo do trabalho foi desenvolver um MR de Staphylococcus aureus para uso em análises de microbiologia de alimentos. Foram selecionadas 10 cepas de S. aureus isoladas de alimentos pelo Setor de Alimentos do Departamento de Microbiologia do Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde da Fundação Oswaldo Cruz (INCQS/Fiocruz). Foi realizada a identificação fenotípica com uso do sistema Vitek 2.0 e genotípica pelo sequenciamento do gene 16S rRNA. A caracterização clonal dos isolados foi realizada pela técnica enterobacterial repetitive intergenic consensus-polymerase chain reaction (ERIC-PCR). A escolha da cepa candidata a bactéria de referência (CBR) foi realizada pela análise filogenética dos isolados comparados com cepas provenientes da American Type Culture Collection (AEspecialização) que são comumente utilizadas nos ensaios microbiológicos. A partir da cepa selecionada, foi produzido um lote de CBR e realizados os testes de pureza, estudo de homogeneidade e estabilidade em curta duração nas temperaturas de 4 ± 2º C e 35 ± 2ºC e em longa duração nas temperaturas de -20 ± 4ºC e de ≤ -70ºC. A avaliação estatística da homogeneidade foi realizada pelo protocolo harmonizado e dos estudos da estabilidade por análise de variância da regressão linear segundo a ABNT ISO GUIA 35:2012. Os 10 isolados foram identificados fenotipicamente como S. aureus. Na análise do gene 16S rRNA, as sequências obtidas foram comparadas com as sequências disponíveis no banco de dados do GenBank para identificação e certificação dos isolados. A cepa 44, isolada de hambúrguer bovino, possuía 87,5% de similaridade com a cepa AEspecialização 6538P de acordo com o dendograma construído a partir da ERIC-PCR, sendo selecionada como CBR. O lote produzido foi considerado puro, suficientemente homogêneo e estável durante 12 meses nas temperaturas de -20 ± 4 ºC e de ≤ -70ºC. Na estabilidade em curta duração o lote foi suficientemente estável em temperatura ≤ 4ºC por até quatro dias. O lote se mostrou adequado para utilização como MR em ensaios de análise de alimentos que utilizam S. aureus como controle interno