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https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/55390
Tipo de documento
TeseDireito Autoral
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Data de embargo
2023-03-02
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ANÁLISE DA RESPOSTA INFLAMATÓRIA EM FÍGADO E BAÇO DE CÃES NATURALMENTE INFECTADOS POR LEISHMANIA INFANTUM
Ruivo, Leonardo Alexandre de Souza | Data do documento:
2020
Autor(es)
Membros da banca
Afiliação
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Resumo
A Leishmaniose Visceral (LV) é uma doença complexa e os sinais clínicos no cão se apresentam de forma muito semelhante aos que ocorrem em humanos. Entre os órgãos afetados pela LV o fígado e o baço aparentam ser afetados em diferentes tempos e com respostas imune e evolução clínica diferenciada. A via de sinalização da MAP4K4 está relacionada a mau prognóstico em diversas patologias além de ser responsável pela ativação, migração, proliferação e apoptose celular. Além disso, MAP4K4 está envolvida na produção de TNFα e dano tecidual. O presente trabalho tem como objetivo avaliar o escore clínico de cães naturalmente infectados com Leishmania infantum, a carga parasitária dos animais e a organização do baço correlacionando esses dados com o perfil inflamatório em fígado e baço de cães por meio da expressão gênica e proteica de MAP4K4 e TNFα e expressão gênica de IFNγ, IL-10, CXCL-8 e CCL-2, além de analisar a presença ou não de dano tecidual nesses tecidos por meio da observação de alterações histológicas e deposição de laminina e fibronectina em baço e fígado e das enzimas hepáticas séricas. Após a separação dos grupos entre as diferentes organizações do baço e a carga parasitária dos animais e pelo escore clínico, não identificamos diferenças entre os diversos marcadores quando separados pela carga parasitária tanto em baço quanto em fígado. MAP4K4 e TNFα encontraram-se intimamente associadas a reações granulomatosas e a macrófagos hepáticos. Dano tecidual foi observado em baço e fígado através do aumento da deposição de fibronectina em animais com alto escore clínico. A expressão gênica de CXCL-8 se manteve relativamente constante em todos os grupos analisados e CCL-2 encontrou-se aumentada nos animais com baço desorganizado e alta carga (DAC) e em animais com médio escore clínico. Não foram observadas alterações, entre os grupos analisados, nas expressões de IFNγ e IL-10 em baço e fígado dos animais. Observamos que a expressão gênica de TNFα estava aumentada em animais DAC, no fígado, quando comparados a animais com baço organizado e baixa carga (OBC) e no baço de animais que apresentaram médio escore clínico quando com parados a animais com baixo e alto escore. Além disso, MAP4K4 teve sua expressão aumentada no fígado de animais com baixo escore clínico quando comparados a animais de alto escore, esse aumento também foi observado no baço de animais OBC e DAC quando comparados a animais com baço desorganizado e baixa carga (DBC). O aumento da expressão gênica de MAP4K4 nos estágios iniciais da doença e a sua relação com áreas de reação granulomatosa sugerem que esta via de sinalização pode estar relacionada com a exacerbação inespecífica da resposta imune e da injúria tecidual, porém sem impactar na carga parasitária
Resumo em Inglês
Visceral Leishmaniasis (VL) is a complex disease and the clinical signs in the dog appear very similar to those that occur in humans. Among the organs affected by VL, the liver and spleen appear to be affected at different times and with different immune responses and clinical evolution. The MAP4K4 signaling pathway is related to poor prognosis in several pathologies in addition to being responsible for cell activation, migration, proliferation and apoptosis. In addition, MAP4K4 is involved in the production of TNFα and tissue damage. The present work aims to evaluate the clinical score of dogs naturally infected with Leishmania infantum, the parasitic load of the animals and the organization of the spleen correlating these data with the inflammatory profile in the liver and spleen of dogs through the MAP4K4 gene and protein expression. and TNFα and gene expression of IFNγ, IL-10, CXCL-8 and CCL-2, in addition to analyzing the presence or absence of tissue damage in these tissues by observing histological changes and deposition of laminin and fibronectin in the spleen and liver and of serum liver enzymes. After separating the groups between the different spleen organizations and the parasitic load of the animals and the clinical score, we did not identify differences between the different markers when separated by the parasitic load in both the spleen and the liver. MAP4K4 and TNFα were found to be strongly associated with granulomatous reactions and hepatic macrophages. Tissue damage was observed in the spleen and liver by increasing the deposition of fibronectin in animals with a high clinical score. The gene expression of CXCL-8 remained relatively constant in all groups analyzed and CCL-2 was found to be increased in animals with disorganized spleen and high load (DS-HG) and in animals with a medium clinical score. There were no changes, between the groups analyzed, in the expressions of IFNγ and IL-10 in the spleen and liver of the animals. We observed that the gene expression of TNFα was increased in DS-HG animals, in the liver, when compared to animals with organized spleen and low load (OR-LW) and in the spleen of animals that presented medium clinical score when compared to animals with low and high score. In addition, MAP4K4 had its expression increased in the liver of animals with low clinical score when compared to animals with high score, this increase was also observed in the spleen of animals OR-LW and DS-HG when compared to animals with disorganized spleen and low load (DS-LW). The increase in MAP4K4 gene expression in the early stages of the disease and its relationship with areas of granulomatous reaction suggest that this signaling pathway may be related to the non-specific exacerbation of the immune response and tissue injury, but without impacting the parasitic burden
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