Use este identificador para citar ou linkar para este item:
https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/55212
Tipo de documento
DissertaçãoDireito Autoral
Acesso aberto
Coleções
Metadata
Mostrar registro completo
DESENVOLVIMENTO E PADRONIZAÇÃO DE MÉTODO DIAGNÓSTICO RÁPIDO UTILIZANDO A PROTEASE RECOMBINANTE SCHISTOSOMA MANSONI CERCARIAL ELASTASE
Oliveira, Alana Karen de | Data do documento:
2022
Autor(es)
Orientador
Coorientador
Membros da banca
Afiliação
Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil
Resumo
A esquistossomose mansoni tem ampla distribuição geográfica no mundo, atingindo 78 países. Atualmente, cerca de 779 milhões de pessoas vivem em áreas de risco para contrair a infecção. Levando em consideração que o saneamento básico não é uma realidade em todas as regiões do Brasil, em especial, nas mais vulneráveis socioeconomicamente e que o trematódeo causador da doença, Schistosoma mansoni, tem por via de transmissão o contato de resíduos fecais contaminados com as reservas hídricas, a Organização Mundial da Saúde (OMS) divulgou, em fevereiro de 2022, as novas diretrizes sobre a esquistossomose humana, onde consta como meta o controle e eliminação da doença como problema de saúde pública até 2030. Posto isso, a presente pesquisa teve por finalidade desenvolver e padronizar um novo método diagnóstico rápido para a esquistossomose mansoni utilizando a plataforma Dot Blotting, avaliando a sensibilidade e especificidade do teste frente as metodologias já empregadas atualmente, Kato-Katz (KK), ELISA SEA e ELISA SWAP, utilizando amostras positivas e negativas coletadas entre 2011 e 2018 em localidades endêmicas do norte de Minas Gerais, além de amostras negativas não endêmicas coletadas em igual período na cidade de Belo Horizonte. Para tanto, foi produzida de forma recombinante a protease de invasão Schistosoma mansoni Cercarial Elastase (SmCEr), utilizando a levedura metilotrófica Pichia pastoris como organismo de expressão, bem como seus anticorpos policlonais (pAbs). A padronização do teste rápido em plataforma Dot Blotting ocorreu com 150 amostras, sendo 50 negativas endêmicas, 50 negativas não endêmicas e 50 positivas. A análise estatística dos resultados foi realizada pelos softwares GraphPad Prism© 9.0 e ImageJ©. Os dados levantados no caminhar do estudo permitiram afirmar que a protease SmCEr tem plena capacidade de ser empregada em teste rápido, permitindo eficaz diagnóstico da esquistossomose mansoni em pacientes com baixa carga parasitária.
Resumo em Inglês
Schistosomiasis mansoni has a wide geographic distribution in the world, reaching 78 countries. Currently, about 779 million people live in areas at risk of contracting the infection. Taking into account that basic sanitation is not a reality in all regions of Brazil, especially in the most socioeconomically vulnerable, and that the disease-causing trematode, Schistosoma mansoni, is transmitted through the contact of contaminated fecal waste with the reserves. The World Health Organization (WHO) released, in February 2022, the new guidelines on human schistosomiasis, where the goal is to control and eliminate the disease as a public health problem by 2030. In order to develop and standardize a new rapid diagnostic method for schistosomiasis mansoni using the Dot Blotting platform, evaluating the sensitivity and specificity of the test against the methodologies currently used, Kato-Katz (KK), SEA ELISA and SWAP ELISA, using positive samples and negative samples collected between 2011 and 2018 in endemic locations in northern Minas Gerais, in addition to non-negative samples endemic species collected in the same period in the city of Belo Horizonte.
For this purpose, the invasive protease Schistosoma mansoni Cercarial Elastase (SmCEr) was recombinantly produced, using the methylotrophic yeast Pichia pastoris as the expression organism, as well as its polyclonal antibodies (pAbs). The standardization of the rapid test on the Dot Blotting platform occurred with 150 samples, 50 of which were endemic negative, 50 non-endemic negative and 50 positive. Statistical analysis of the results was performed using GraphPad Prism© 9.0 and ImageJ© software. The data collected during the study allowed us to state that the SmCEr protease has full capacity to be used in a rapid test, allowing an efficient diagnosis of schistosomiasis mansoni in patients with low parasite burden.
Compartilhar