Desenvolvimento de um teste de captura de antígeno para filariose linfática utilizando anticorpos contra a proteína recombinante Wb14

Abstract

A Filariose Linfática (FL) é uma parasitose endêmica de regiões tropicais e subtropicais, provocada pelos vermes nematóides Wuchereria bancrofti, Brugia malayi e Brugia timori e transmitida pelo mosquito Culex quinquefasciatus. Para o seu diagnóstico, o exame parasitológico é barato e eficiente, mas possui limitações devido à periodicidade noturna das microfilárias, o que diminui a sensibilidade. Sabe-se que as técnicas sorológicas são uma opção necessária, pois além de apresentarem elevada sensibilidade, não possuem limitação temporal. Em contrapartida, os testes sorológicos de captura de antígenos existentes no mercado apresentam custo elevado e não são espécie-específicos. O presente trabalho objetiva avaliar a eficácia de anticorpos monoclonais e policlonais dirigidos contra o antígeno rWb14 de W. bancrofti para o desenvolvimento de um novo teste diagnóstico para a FL. Primeiro, a proteína Wb14 recombinante (rWb14) foi expressa em Escherichia coli, purificada por cromatografia de afinidade e utilizada na purificação dos anticorpos policlonais por imunoadsorção. Para verificar a eficiência de reconhecimento dos anticorpos monoclonais e policlonais foi produzido o extrato do verme adulto de W. bancrofti. Primeiramente o extrato foi exposto aos anticorpos produzidos contra rWb14, porém não houve nenhum reconhecimento. Depois soros de pacientes positivos e negativos foram separados eletroforéticamente e expostos aos anticorpos monoclonais e policlonais para reconhecimento do antígeno filarial circulante, mas o resultado esperado não foi obtido. Após isso, um conjunto de soros de pacientes positivos para FL, detectaram no extrato uma nova banda diagnóstica de aproximadamente 14 kDa que será alvo de investigações posteriores. Ao mesmo tempo, um ensaio de ELISA de captura de antígeno foi padronizado utilizando diferentes combinações de anticorpos, que foi sensível no reconhecimento da rWb14 nas quatro condições analisadas. Este ELISA foi testado com soros de diferentes grupos de indivíduos, mas apenas dois soros de pacientes microfilarêmicos foram reconhecidos em apenas uma destas condições. Mais testes deverão ser realizados para determinar a real sensibilidade e especificidade desse teste frente a um número maior de amostras de soros .