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AVALIAÇÃO DO EFEITO IN VITRO DA VACINA BCG MOREAU NA EXPRESSÃO DE MARCADORES FENOTÍPICOS E NO PERFIL DE PRODUÇÃO DE CITOCINAS EM ADULTOS E NEONATOS
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Abstract in Portuguese
A tuberculose (TB), doença infecciosa milenar causada pelo Mycobacterium tuberculosis e que comumente atinge os pulmões, é um grave problema de saúde pública mundial. O M. bovis BCG é a única vacina secular contra TB aprovada e disponível para uso em todo o mundo, sendo aplicada para prevenir as formas graves da doença em crianças. Mesmo assim, pouco ainda se sabe sobre os seus mecanismos protetores. Neste estudo, buscamos identificar a capacidade da vacina BCG Moreau de modular in vitro a expressão dos marcadores fenotípicos TLR4, B7-1, DEC-1, TIM-3 e EP2 em células mononucleares de adultos vacinados e neonatos sem vacinas prévias, avaliando, paralelamente, os níveis de mediadores imunológicos produzidos. As células mononucleares foram analisadas através do método de citometria de fluxo e os sobrenadantes de cultura foram dosados através de método singular (ELISA) e multiplex (Luminex e CBA). A vacina Moreau BCG induziu um maior percentual de células expressando TLR4, B7-1 (p<0,05), DEC-1 e EP2 (p<0,005) em monócitos de doadores adultos, mas não em neonatos. A vacina BCG Moreau foi capaz de induzir um aumento nos níveis de PGE2, IL-10, IL-22, TNF (p<0,001), IL-17F, IL-21, IL-23, IL-25, IL-31, IL-33 e sCD-40L (p<0,005), mas uma diminuição nos níveis de MCP-1 (p<0,005) em doadores adultos vacinados com BCG. Já nos doadores neonatos não vacinados, houve uma diminuição nos níveis de IL-18 (p<0,005) e TGF-β (p<0,05), e um aumento nos níveis in vitro de IL-2 (p<0,05), G-CSF, GM-CSF e MIP-1β (p=<0,001). Em ambos os grupos estudados, encontramos um aumento nos níveis de IL-1β (p<0,05), IL-4, IFN-γ, IL-17A e IL-8 (p<0,001, neonatos; p<0,05, adultos). Em geral, a vacina BCG Moreau demonstrou ser capaz de induzir in vitro moléculas de superfície nos monócitos de adultos sadios já primados com a vacina BCG, assim como uma expressão diferencial de citocinas nos dois grupos avaliados, as quais possivelmente estão relacionadas à proteção da TB
Abstract
Tuberculosis (TB), an ancient infectious disease triggered by Mycobacterium tuberculosis that commonly affects the lungs, is a serious public health problem worldwide. The M. bovis BCG is the only secular vaccine against TB approved and available for use globally, being applied to prevent the severe forms of the disease in children. Even so, little is known about its protective mechanisms. In this study, we aim to identify the ability of the BCG Moreau vaccine to modulate the in vitro expressions of the phenotypic markers TLR4, B7-1, DEC-1, TIM-3 and EP2 in mononuclear cells from vaccinated healthy adult and neonates without previous vaccines, evaluating, in parallel, the levels of immunological mediators produced. Mononuclear cells were analyzed using the flow cytometry, and the culture supernatants were assayed using the single (ELISA) and multiplex (Luminex and CBA) approaches. The Moreau BCG vaccine induced an higher percentage of cells expressingTLR4, B7-1 (p<0,05), DEC-1 and EP2 (p<0,005) in monocytes from adult donors, but not in neonates. The BCG Moreau vaccine was able to induce increased levels of PGE2, IL-10, IL-22, TNF (p<0,001), IL-17F, IL-21, IL-23, IL-25, IL-31, IL-33 and sCD-40L (p<0,005), but decreased MCP-1 levels (p<0,005) in BCG-vaccinated adult donors. In non-vaccinated newborn donors, there was a decrease in IL-18 (p<0,005) and TGF-β (p<0,05) levels, and an increase in the IL-2 (p<0,05), G-CSF, GM-CSF and MIP-1β (p=<0,001) levels. In both groups studied, we found an increase in IL-1β (p<0,05), IL-4, IFN-γ, IL-17A and IL-8 levels (p<0,001, neonates; p<0,05, adults). In general, the BCG Moreau vaccine was able to induce in vitro surface molecules on monocytes from healthy adults already primed with the BCG vaccine, as well as a differential expression of cytokines in the two groups evaluated, which are possibly related to TB protection
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