Aplicação da técnica de amplificação isotérmica em alça (LAMP) para o diagnóstico da Leishmaniose visceral

Abstract

A Leishmaniose Visceral (LV) é uma infecção causada por protozoários do complexo Leishmania donovani, no Brasil o agente etiológico é a espécie Leishmania infantum, e encontra-se entre as seis endemias consideradas prioritárias no mundo. O diagnóstico precoce desta parasitose é de grande importância, pois quando não tratados ou tratados tardiamente os casos têm maior letalidade. A visualização do parasito em amostras de punção de medula óssea é definida como método de diagnóstico padrão ouro, entretanto, é considerado um procedimento invasivo e necessita de ambiente adequado e profissionais capacitados. A técnica de Amplificação Isotérmica em Alça (LAMP) é um teste molecular de amplificação de DNA que não requer o uso de termocicladores, podendo ser realizado em banho-maria, pois toda a reação acontece a uma temperatura constante. Tendo em vista todas as vantagens do método LAMP, este estudo propôs a otimização e aplicação desta técnica para diagnóstico da LV em indivíduos residentes no município de Tamandaré, no estado de Pernambuco. Nesta pesquisa, foram coletadas amostras de sangue periférico de 83 indivíduos residentes do município em questão. Nos ensaios de otimização do LAMP foi avaliada a sensibilidade, sendo possível detectar o DNA de Leishmania infantum até a concentração de 100ag e, nos ensaios de especificidade, apenas amostras contendo DNA de Leishmania infantum foram positivas. Quando o sistema LAMP foi aplicado para o diagnóstico da LV nas amostras coletadas, não houve resultados positivos. Na aplicação da Reação em Cadeira da Polimerase (PCR) utilizando o sistema ITS1 para diagnóstico da LV, todos os pacientes também foram negativos. A partir desta pesquisa, o sistema de LAMP pode ser considerado sensível e específico para detecção molecular de DNA de Leishmania infantum no Brasil. Estudos posteriores aplicando amostras clínicas positivas são necessários afim de definir a sensibilidade e especificidade analítica deste sistema .