Impacto da redução do número de camundongos no ensaio de potência NIH para avaliação das vacinas contra raiva de uso humano

Abstract

A raiva é uma antropozoonose viral infecciosa, altamente letal, transmitida por mamíferos e caracterizada como uma encefalite aguda progressiva. A OMS estima que cause 59.000 mortes humanas, anualmente no mundo. No Brasil ocorreram 41 casos da doença de 2008 a 2018. A prevenção consiste na aplicação de vacinas, em pessoas expostas ao contato com o vírus. As vacinas modernas de cultivo celular são altamente eficazes na prevenção da doença, mas necessitam de rigoroso controle da qualidade antes do uso. O Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde (INCQS) é responsável pela liberação de lotes de imunobiológicos. A determinação da potência das vacinas é o controle mais crítico, como indicador de consistência de produção. A potência é avaliada pelo teste de desafio em camundongos que utiliza um grande número de animais e lhes causa dor e sofrimento. Com o avanço da consciência ética, bem-estar animal e necessidade da substituição dos modelos utilizados na pesquisa, busca-se o desenvolvimento de métodos alternativos que demonstrem a consistência de produção destas vacinas. O ensaio de potência NIH apresenta uma série de problemas inerentes aos ensaios em animais e há um movimento internacional na busca por aplicação dos 3Rs, como ensaios modificados com redução do número de animais e ensaios sorológicos, assim como uma substituição total por um método imunoenzimático. O presente trabalho avaliou impactos da redução do número de camundongos utilizado nos ensaios para o controle da qualidade das vacinas antirrábicas de uso humano de 16 para oito animais por diluição de vacina Uma análise retrospectiva de dados comparou os dados obtidos com 251 amostras de vacina testadas no ensaio padrão (EP), utilizando 16 animais por diluição, com os resultados obtidos apenas com as primeiras gaiolas - grupo G1 e considerando as segundas gaiolas como uma replicata desta - grupo G2, ambas com oito animais apenas por diluição. A relevância do ensaio reduzido foi avaliada comparando os resultados do EP com os resultados obtidos por G1 e G2 utilizando: o índice kappa, o gráfico de Bland-Altman, o Coeficiente de Concordância de Correlação e parâmetros sensibilidade e especificidade. A confiabilidade do ensaio foi avaliada pelo CV% e limites de confiança, enquanto o impacto da redução foi avaliado pela análise no intervalo de confiança das potências e nos parâmetros regressão, linearidade e paralelismo. Os resultados obtidos indicam que as modificações do ensaio padrão NIH reduzido para oito camundongos por diluição é viável para ser aplicado nos ensaios rotineiros de potência, com informações estatísticas completas sobre a validade de cada determinação de potência individual, e que pode reduzir em 50% o número de animais utilizados nas vacinas teste