Avaliação da migração de macrófagos infectados por Leishmania em ambiente tridimensional

Abstract

INTRODUÇÃO: As leishmanioses podem apresentar diferentes manifestações clínicas, que variam de lesões na pele no local da inoculação até lesões disseminadas para órgãos internos como baço e fígado. A disseminação e homing de células infectadas contendo antígenos de Leishmania são fundamentais para a sobrevivência e estabelecimento do parasito no hospedeiro. Entretanto, ainda hoje, pouco se sabe sobre os mecanismos envolvidos na adesão da célula hospedeira e sua migração na infecção por este protozoário. Em estudo realizado em ambiente bidimensional, foi observada redução da migração de macrófagos após a infecção por L. amazonensis, associada a redução da formação de complexos de adesão e alteração da dinâmica de actina. Entretanto, o processo de migração transendotelial de macrófagos envolve sinais regulatórios oriundos de um ambiente tridimensional. OBJETIVO: Assim, o presente estudo tem como objetivo avaliar a migração de macrófagos infectados por Leishmania e os mecanismos envolvidos neste processo, em ambiente tridimensional. METODOLOGIA: Para isso, macrófagos derivados de medula óssea foram infectados por L. amazonensis, L. braziliensis ou L. infantum e colocados em matriz de colágeno I para avaliação da migração utilizando High-Content Analysis System do modelo Operetta (PerkinElmer). Adicionalmente, avaliamos a formação de complexos de adesão pela imunomarcação de p-FAK e p-paxilina, a polimerização do citoesqueleto de actina por faloidina, Cdc42, RhoA, Rac1 e gelsolina, utilizando microscopia confocal ou quantificação da intensidade média de fluorescência por poço através do Operetta. Além disso, utilizando matrigel, avaliamos a secreção de proteases por estas células. RESULTADOS: Nossos resultados mostram redução da migração de macrófagos infectados por L. amazonensis, L. braziliensis e L. infantum em ambiente tridimensional. Adicionalmente, as análises mostram que a infecção por diferentes espécies de Leishmania não altera a área de degradação de matriz extracelular por macrófagos. CONCLUSÃO Nossos dados em conjunto mostram que a infecção por L. amazonensis, L. braziliensis ou L. infantum leva à redução da migração de macrófagos em ambiente tridimensional. Esta redução na migração está associada à alteração da dinâmica de actina e redução formação de complexos de adesão nessas células.