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https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/50384
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AVALIAÇÃO DA MIGRAÇÃO DE CÉLULAS DENDRÍTICAS INFECTADAS POR LEISHMANIA SPP
Paixão, Amanda Rebouças | Data do documento:
2020
Autor(es)
Orientador
Membros da banca
Afiliação
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / Universidade Federal da Bahia. Faculdade de Medicina. Salvador, BA, Brasil.
Resumo
INTRODUÇÃO: Leishmania é um parasito intracelular capaz de causar lesão na pele, mucosa e órgãos internos. A disseminação e homing de células infectadas contendo antígenos de Leishmania são fundamentais para a sobrevivência do parasito no hospedeiro e para o estabelecimento da lesão. Estudo recente demonstrou que a infecção por Leishmania reduz a migração de macrófagos, associada à redução da expressão de proteínas envolvidas em formação de complexos de adesão, assim como sua fosforilação. Os autores mostram ainda que existe um aumento na frequência de polimerização e turnover de filamentos de actina em macrófagos após a infecção por L. amazonensis. Entretanto, pouco se conhece sobre a migração de células dendríticas infectadas por Leishmania e os mecanismos envolvidos nesse processo. OBJETIVO: Assim, a presente proposta tem como objetivo avaliar a migração de células dendríticas infectadas por diferentes espécies de Leishmania, além de isolados de L. braziliensis associados à forma localizada ou disseminada da doença. MATERIAL E MÉTODOS: Para isso, células dendríticas humanas obtidas de doadores saudáveis foram cultivadas e infectadas por Leishmania sp. e submetidas à migração utilizando quimioatrator específico para essas células, em sistema transwell. Adicionalmente, avaliamos a formação de complexos de adesão pela imunomarcação de p-FAK e p-paxilina, a polimerização do citoesqueleto de actina por faloidina e proteínas importantes nesse processo como Cdc42, RhoA e Rac1, utilizando microscopia confocal. Por fim, avaliamos ainda a expressão de CCR7 por citometria de fluxo. RESULTADOS: A análise dos experimentos mostra um aumento da migração de células dendríticas após a infecção por L. infantum até 48h após a infecção, ao passo que houve apenas um aumento transitório nas células infectadas por L. amazonensis e uma redução na migração das células infectadas por L. braziliensis. Associado a isto, nosso trabalho mostra um aumento na formação de complexos de adesão e polimerização do citoesqueleto de actina nas células dendríticas infectadas por L. infantum e uma redução nos grupos infectados por L. amazonensis ou L. braziliensis. Adicionalmente, mostramos um aumento na migração de células dendríticas infectadas por L. braziliensis isoladas de pacientes com a forma disseminada da doença, em comparação com isolados de pacientes com a forma localizada da Leishmaniose. Mostramos ainda um aumento da formação de complexos de adesão e polimerização de actina nas células infectadas L. braziliensis isoladas de pacientes com a forma disseminada da doença, em comparação àquelas infectadas com os isolados de pacientes com a forma localizada. Por fim, observamos também um aumento da expressão de CCR7 tanto em células infectadas por L. infantum, quando comparadas com células infectadas por L. amazonensis ou L. braziliensis, quanto em células infectadas por L. braziliensis isoladas de pacientes com a forma disseminada da doença, em comparação com células infectadas isolados de pacientes com a forma localizada. CONCLUSÕES: Em conclusão, nosso trabalho sugere que células dendríticas são importantes para a visceralização da doença e disseminação de Leishmania no hospedeiro vertebrado.
Resumo em Inglês
INTRODUCTION: Leishmania is an intracellular parasite that causes lesions in the skin, mucosa, and internal organs. The dissemination and homing of infected cells containing Leishmania antigens are crucial for the survival of the parasite in the host and the establishment of the infection. A recent study has shown that Leishmania infection reduces macrophage migration, associated with reduced expression of proteins involved in the formation of adhesion complexes, as well as their phosphorylation. The authors also show that there is an increase in the frequency of polymerization and turnover of actin filaments in macrophages after L. amazonensis infection. However, the migration of dendritic cells infected by Leishmania and the mechanisms involved in this process remain unknown. AIM: Thus, the present proposal aims to evaluate the migration of dendritic cells infected by different Leishmania species, in addition to L. braziliensis isolates obtained from patients with the localized or disseminated form of the disease. MATERIAL AND METHODS: For this, human dendritic cells obtained from healthy donors were cultivated and infected by Leishmania sp. and submitted to migration using a specific chemoattractant to these cells in a transwell system. Additionally, we evaluated the formation of adhesion complexes through p-FAK and p-paxillin evaluation, the polymerization of the actin cytoskeleton by phalloidin, and essential proteins in this process such as Cdc42, Rho and Rac-1, using confocal microscopy. We also evaluated CCR7 expression using flow cytometry. RESULTS: Our results show an increase in dendritic cell migration after L. infantum infection up to 48 h after infection, while there was only a transient increase in L. amazonensis-infected cells and a reduction in the migration of L. braziliensis-infected cells. We also showed an increase in the adhesion complexes formation and polymerization of the actin cytoskeleton in L. infantum-infected dendritic cells, which was not observed in L. amazonensis- or L. braziliensis-infected cells. Also, we found an increase in the migration of dendritic cells infected by L. braziliensis isolates obtained from patients with the disseminated form of the disease, but not in those infected by the isolates obtained from patients with the localized form. Together with this, we also showed an increase in the adhesion complexes formation and polymerization of the actin cytoskeleton in cells infected with the isolates from patients with the disseminated form of the disease. Finally, we also observed an increase in the expression of CCR7 in both L. infantum-infected cells and in cells infected by the L. braziliensis isolates from patients with the disseminated form of the disease. CONCLUSIONS: In conclusion, our results suggest that dendritic cells are important for the visceralization of the disease and dissemination of Leishmania parasites in the vertebrate host.
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