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CARACTERIZAÇÃO FENOTÍPICA E MOLECULAR DE AMOSTRAS DE NEISSERIA MENINGITIDIS ISOLADAS DE PORTADORES ASSINTOMÁTICOS DA REGIÃO METROPOLITANA DO RIO DE JANEIRO
Portadores assintomáticos
MLST
Tipagem de Sequências Multilocus
Fatores de risco
Portadores assintomáticos
Gene rplF
Capsule null locus
Multilocus Sequence Typing
Risk Factors
Souza, Talita Coelho | Fecha del documento:
2020
Titulo alternativo
Phenotypic and molecular characterizarion of Neisseria meningitidis from asymptomatic carriers in Rio de Janeiro metropolitan area, BrazilAutor
Co-director
Miembros de la junta
Afiliación
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde. Rio de Janeiro, RJ, Brasil
Resumen en portugues
A Doença Meningocócica (DM) representa um problema de saúde pública mundial. No Brasil a DM é endêmica e a maioria dos casos da doença é causada pelo sorogrupo C. Em situações endêmicas, estima-se que 10% da população saudável carreia N. meningitidis (Nm) na nasofaringe. A identificação de grupos de risco, especialmente os portadores de cepas hipervirulentas, é importante para avaliar a necessidade e viabilidade de intervenção. O desenvolvimento e o uso eficaz das vacinas dependem do conhecimento do seu efeito sobre os portadores. Os objetivos do presente estudo foram estimar a prevalência de portadores assintomáticos de Nm entre adultos jovens na região metropolitana do Rio de Janeiro, e caracterizar as amostras quanto à composição clonal, sorogrupos, proteínas de membrana e suscetibilidade aos antimicrobianos. A coleta de dados foi realizada entre maio/2016 e maio/2018 com a aplicação de questionário com dados demográficos e clínicos e coleta de espécime de orofaringe. Foram incluídos no estudo voluntários de 18 a 35 anos de quatro instituições de ensino do Rio de Janeiro e de Niterói. A identificação das amostras foi realizada por MALDI-TOF e sequenciamento de rplF. A suscetibilidade aos antimicrobianos foi determinada por disco-difusão para azitromicina, ceftriaxona, ciprofloxacino, cloranfenicol, meropenem, minociclina, rifampicina e trimetoprim-sulfametoxazol, e por difusão em gradiente de concentração para ampicilina, levofloxacino e penicilina. Os genogrupos foram detectados por PCR para A, B, C, E, W, X, Y e Z, e a tipificação realizada por MLST. A presença de “capsule null locus” (cnl) foi investigada nas amostras não genogrupáveis (NG), e as variantes das proteínas PorA e FetA foram determinadas para todas as amostras. Dentre os 373 voluntários incluídos no estudo, 51 (13,67%) estavam colonizados por Nm. O genogrupo mais prevalente foi B (3,48%), seguido por C (1,07%), E (0,80%), Z (0,53%) e Y (0,26%). Mais de metade das amostras foram classificadas como cnl (cnl¬-2, cnl-3 e cnl-12) ou NG. As variantes da PorA mais frequentes foram VR1 22, VR2 13-70, VR2 23 e VR3 35-1, e a F5-5 da FetA. Suscetibilidade reduzida ou resistência à penicilina, trimetoprim-sulfametoxazol, ampicilina e rifampicina foi observada em 76,4%, 70,5%, 65,2% e 3,9% das amostras, respectivamente. As mutações A510V, F504L, H541N, I515V e I566V em penA foram detectadas em quatro amostras com resistência intermediária à ampicilina e penicilina. Seis complexos clonais (CC) foram detectados em mais de uma amostra, sendo CC53 e CC198 predominantes entre as amostras cnl. Linhagens hipervirulentas (CC11, CC32, CC41/44, CC103, CC213, CC269 e CC4821) foram identificadas em 27,5% das amostras. Foi observada uma associação independente entre a colonização por Nm e homens homossexuais, frequência a bares/boates/escolas de samba ≥1 vez/mês e sexo masculino, bem como risco reduzido para colonização em indivíduos de cor parda/preta.
Resumen en ingles
Meningococcal disease (MD) is a worldwide public health. In Brazil, MD is endemic and most of the recent cases of the disease was caused by serogroup C. In endemic situations, about 10% of the healthy population carries N. meningitidis (Nm) in the nasopharynx. Identifying risk groups for carriage, especially carriers of hypervirulent strains, is important to assess the need and feasibility of intervention. Development and effective use of meningococcal vaccines depend on the knowledge of their effect on carriers. This study aimed to estimate the prevalence of asymptomatic carriers of Nm among young adults from the metropolitan area of Rio de Janeiro, and to classify the isolates in serogroups, determine membrane proteins variants, antimicrobial susceptibility, and clonal composition. A cross-sectional study was conducted between May/2016 and May/2018 with oropharyngeal swab sampling. Demographic data and potential risk factors were assessed by a self-administered questionnaire. Participants were recruited among students aged 18–35 years attending four public educational institutions. Bacterial identification was assessed by MALDI-TOF and sequencing of the rplF gene. Susceptibility to antimicrobial agents was determined by disk-diffusion for azithromycin, ceftriaxone, ciprofloxacin, chloramphenicol, meropenem, minocycline, rifampicin, and trimethoprim-sulfamethoxazole, and by diffusion in a concentration gradient for ampicillin, levofloxacin, and penicillin. Isolates were classified in genogroups A, B, C, E, W, X, Y and Z by PCR, and typing by MLST. The capsule null locus (cnl) was investigated in the nongroupable (NG) isolates, and the variants of the PorA and FetA proteins were determined for all isolates. Among the 373 volunteers included in the study, 51 (13.67%) were colonized by Nm. The most prevalent genogroup was B (3.48%), followed by C (1.07%), E (0.80%) %), Z (0.53%) and Y (0.26%). More than half of the isolates were classified as cnl (cnl-2, cnl-3 and cnl-12) or NG. The most frequent PorA variants were VR1 22, VR2 13-70, VR2 23 and VR3 35-1, and F5-5 from FetA. Reduced susceptibility or resistance to penicillin, trimethoprim-sulfamethoxazole, ampicillin and rifampicin was observed in 76.4%, 70.5%, 65.2% and 3.9% of the isolates, respectively. The A510V, F504L, H541N, I515V and I566V mutations in penA were detected in four intermediate resistant isolates to ampicillin and penicillin. Six clonal complexes (CC) were detected in more than one isolate, with predominance of CC53 and CC198 among cnl isolates. Hypervirulent strains (CC11, CC32, CC41/44, CC103, CC213, CC269 and CC4821) were identified in 27.5% of isolates. An independent association was observed between colonization by Nm and homosexual men, attendance to bars/nightclubs/samba clubs ≥1 time/month and male sex, as well as decreased risk for colonization in black people.
Palabras clave en portugues
Neisseria meningitidisPortadores assintomáticos
MLST
Tipagem de Sequências Multilocus
Fatores de risco
Palabras clave en ingles
Neisseria meningitidisPortadores assintomáticos
Gene rplF
Capsule null locus
Multilocus Sequence Typing
Risk Factors
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