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PADRÕES IMUNOPATOLÓGICOS QUE INFLUENCIAM NO DESFECHO CLÍNICO DAS LESÕES CUTÂNEAS OCASIONADAS POR LEISHMANIA (VIANNIA) BRAZILIENSIS NO MODELO HAMSTER DOURADO (MESOCRICETUS AURATUS)
Citocinas
Arginase
Mesocricetus
Óxido Nítrico Sintase Tipo II
Araujo, Thais Braga Gomes | Fecha del documento:
2020
Director
Afiliación
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Resumen en portugues
A leishmaniose tegumentar americana (LTA) é uma doença de ampla incidência, cuja principal espécie envolvida é a Leishmania (Viannia) braziliensis. Um modelo promissor para estudo dessa doença é o hamster dourado (Mesocricetus auratus). Resultados prévios de nosso grupo utilizando esse modelo e crescentes inóculos do parasito (104 , 105 e 106 promastigotas de L. braziliensis /20 µL) demonstraram que o tamanho e gravidade das lesões não foram proporcionais ao inóculo e que aos 50 dias de infecção, as lesões ocasionadas pelos inóculos de 105 e 106 evoluíram similarmente. Isso sugere que há características particulares que influenciam no desfecho e evolução da doença. Baseado nisso, objetivamos descrever as características histopatológicas, determinar o perfil de citocinas (IFN \0263, IL-10, TGF-\03B2, TNF, IL-4 e IL-6) e enzimas (iNOS e arginase) em 4h, 24h, 15, 30 e 50 dias pósinfecção (dpi) em peles de hamsters infectados com L. (Viannia) braziliensis. Para isso, utilizamos técnicas histopatológicas e PCR em tempo real. Também detectamos igG anti-Leishmania por meio de ELISA. Fizemos análises em rede e paramétrica desses biomarcadores e imunohistoquímica anti-Leishmania às 4h e 24h. Observamos que, o tempo de surgimento das lesões foi inversamente proporcional ao inóculo. Contudo, o aspecto e a mediana do tamanho das lesões e presença de IgG foram diretamente proporcionais ao tempo de infecção e ao inóculo. Até 15 dpi, o parasito se replicou ativamente sem sinais clínicos. O aparecimento de lesões coincidiu com o aumento de TGF- \03B2. A arginase aumentou até 50 dpi, o que favoreceu a replicação parasitária. Houve também aumento de iNOS na maior parte dos animais nesse período, o que não conteve a carga parasitária. Houve modulação positiva de IL-6, IL-10 e IL-4 nos animais dos inóculos 105 e 106 , mas não nos inoculados com 104 parasitos às 4h. Às 24h, houve indução de IFN-\03B3 e TNF. Foram observadas às 4h antígenos de Leishmania fragmentados e às 24h algumas amastigotas íntegras. A análise multivariada mostrou que IFN-\03B3 foi a única citocina que impactou na evolução clínica. As análises de rede mostraram que os animais infectados com 104 promastigotas/20 µL e aqueles que, independentemente da carga parasitária evoluíram com controle da doença tiveram um maior número de interações positivas.
Resumen en ingles
American cutaneous leishmaniasis (ACL) is a wide-incidence disease, mainly caused by Leishmania (Viannia) braziliensis. Golden Hamster (Mesocricetus auratus) has showed up as a promising model to study this disease. Previous results from our group using increasing parasite (104 , 105 and 106 L. braziliensis promastigote/20 \03BCL) inoculum in this model demonstrated that injuries' size and severity were not proportional to the inoculum, and that on the 50th day of infection, injuries induced by 105 and 106 inoculum had similar development. This data suggests that particular characteristics have an effect on ACL outcome and evolution. Thus, we aimed to describe histopathological characteristics, and to determine the profile of cytokines (IFN \0263, IL-10, TGF-\03B2, TNF, IL-4 e IL-6) and enzymes (iNOS and arginase) at 4h, 24h, 15 days, 30 days and 50 days post-infection (dpi) in hamster\2019s skin infected with L. (Viannia) braziliensis. Therefore, we used histopathological techniques and real-time PCR. Also, we detected anti-Leishmania igG through ELISA. At 4h and 24h postinfection, we performed network and parametric analyses, and anti-Leishmania immunohistochemistry. The time of injuries\2019 onset was inversely proportional to the inoculum. However, aspect and size of injuries, and IgG presence were directly proportional to the time of infection and inoculum. Until 15 dpi, parasite actively replicated without any clinical signs. However, injurie\2019s onset coincided with TGF-\03B2 increase. Arginase increased up to 50 dpi, which worked in favor of parasitic replication. During this period, most animals presented an iNOS increase, which did not prevent parasitic replication. There was positive modulation of IL-6, IL-10 and IL4 on models infected with 105 and 106 inoculums, but not on those inoculated with 104 parasites, at four hours post infection. Within 24h, there was IFN-\03B3 and TNF induction. In addition, at 4h post-infection, we observed Leishmania fragmented antigens, and at 24 hours, some intact amastigotes. Multivariate analysis showed that IFN-\03B3 was the only cytokine that actually impacted clinical evolution. Network analysis showed that animals infected with 104 promastigotes/20 µL inoculum, and those who have evolved to disease control, regardless of parasite load, had a greater number of positive interactions.
Palabras clave en portugues
Leishmania braziliensisCitocinas
Arginase
Mesocricetus
Óxido Nítrico Sintase Tipo II
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