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DissertaçãoDireito Autoral
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Objetivos de Desenvolvimento Sustentável
03 Saúde e Bem-EstarColeções
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IDENTIFICAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DE MARCADORES MICROSSATÉLITES DE PANSATRONGYLUS MEGISTUS (BURMEISTER, 1835) (TRIATOMINAE: REDUVIIDAE)
Panstrongylus megistus
Doença de Chagas
Genética
Ultraestrutura
Microssatélites
Ferreira, Flávio Campos | Data do documento:
2019
Autor(es)
Orientador
Coorientador
Membros da banca
Afiliação
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Rene Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil.
Resumo
Os triatomineos sao insetos hematofagos vetores do Trypanosoma cruzi, o agente etiologico da doenca de Chagas. Atualmente sao descritas 152 especies de triatomineos sendo 65 autoctones do Brasil, entre essas especies o Panstrongylus megistus e considerado o de maior importancia epidemiologia no Sudeste do Brasil devido a sua ampla distribuicao geografica alta capacidade de colonizacao, alta antropofilia e altos niveis de infeccao natural. A permanencia deste vetor no ambiente artificial (casas e anexos) tem sido um desafio para o controle da doenca de Chagas (DCh), nao existindo nenhuma evidencia da origem dos processos de (re)infestacao dos domicilios, se esta ocorre a partir de focos externos e/ou residuais, colocando sob risco as populacoes rurais em sua area de ocorrencia. A genetica de populacoes e uma importante ferramenta para estimar a dinamica entre habitats, podendo auxiliar na compreensao da ecoepidemiologia da DCh. Estudos ja realizados com outras especies de triatomineos demonstraram que marcadores microssatelites sao capazes de revelar o fluxo genico em escala microgeografica. No entanto tais marcadores ainda nao haviam sido descritos para esta especie vetora. Neste contexto o objetivo deste trabalho foi identificar e padronizar marcadores microssatelites para P. megistus para serem utilizados em analises futuras de genetica de populacoes. O sequenciamento genomico em plataforma Illumina HiSeqX foi utilizado para montagem de reads e posterior busca de microssatelites. Foram identificadas 2.043.690 regioes utilizando o programa MISA, destas, 96 foram selecionadas para a padronizacao da amplificacao, das quais 79 loci amplificaram por PCR utilizando o DNA de seis exemplares de tres localidades distintas (dois insetos de Santana do Riacho/Minas Gerais, dois insetos de Juquia/Sao Paulo, e dois insetos de uma colonia formada por individuos de diferentes localidades de Minas Gerais). Dentre estes, 20 dos 51 loci polimorficos foram utilizados para a determinacao dos alelos por genotipagem em 19 P. megistus provenientes de: Jaboticatubas/MG (15), Santana do Riacho/MG (2) e Juquia/SP (2); e de um exemplar de: Panstrongylus diasi, Panstrongylus lignarius, Triatoma tibiamaculata, e Triatoma sordida. A determinacao dos alelos foi possivel em 19 loci, sendo 16 polimorficos. O numero de alelos por locus variou de 1 a 9 com medida de 4,7. A heterozigozidade observada variou de 0,15 a 0,57 enquanto a esperada foi de 0,14 a 0,83 com media de 0,25 e 0,59 respectivamente. Foi possivel observar a amplificacao em outra especie de triatomineo em 12 loci. Dessa forma, a estrategia utilizada mostrou-se eficicaz para o desenvolvimento de marcadores de microssatelites. A proxima etapa sera avaliar a dinamica populacional de infestacoes do ambiente artificial por esta especie.
Resumo em Inglês
Triatomine are hematophagous insects’ vectors of Trypanosoma cruzi, the etiological agent of Chagas disease. Currently 152 species of Triatomine are described, being 65 native to Brazil. Among these species Panstrongylus megistus is considered the most important epidemiology in Southeast Brazil due to its wide geographical distribution, high colonization capacity, high anthropophilia and high levels of natural infection. The permanence of this vector in the artificial environment (houses and annexes) has been a challenge to control Chagas disease (CD), and there is no evidence of the origin of the (re) infestation rural populations in their area of risk. Population genetics is an important tool for estimating the dynamics between habitats and may help in understanding the eco-epidemiology of CD. Studies with other triatomine species have shown that microsatellite markers are able to reveal gene flow on a microgeographic scale. However, such markers had not yet been described for this vector species. In this context the objective of his work was to identify and standardize microsatellite markers for P. megistus for use in future population genetics analyzes. The Illumina HiSeqX platform genomic sequencing was used for reading assembly and subsequent microsatellite search. 2,043,690 regions were identified using the MISA program, of which 96 were selected for amplification standardization, of which 79 loci were PCR amplified using DNA from six specimens from three different locations (two insects from Santana do Riacho / Minas Gerais, two insects from Juquiá / São Paulo, and two insects from a colony formed by individuals from different localities of Minas Gerais). Among these, 20 of the 51 polymorphic loci were used to determine alleles by genotyping in 19 P. megistus from: Jaboticatubas / MG (15), Santana do Riacho / MG (2) and Juquiá / SP (2); and a copy of: Panstrongylus dias, Panstrongylus lignarius, Triatoma tibiamaculata, and Triatoma sordida. The determination of alleles was possible in 19 loci, being 16 polymorphic. The number of alleles per locus ranged from 1 to 9 with a mean of 4.7. The observed heterozygosity ranged from 0.15 to 0.57 while the expected was 0.14 to 0.83 with a mean of 0.25 and 0.59 respectively. It was possible to observe amplification in another triatomine species at 12 loci. Thus, the strategy used was effective for the development of microsatellite markers. The next step will be to evaluate the population dynamics of artificial environment infestations by this species.
Palavras-chave
TriatomíneosPanstrongylus megistus
Doença de Chagas
Genética
Ultraestrutura
Microssatélites
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