Caracterização do perfil de expressão dos genes de relógio circadiano em células da linhagem Aag2 de Aedes aegypti infectadas e não infectadas pelo vírus Dengue 2 (DENV2)

Abstract

Aedes aegypti (Diptera:Culicidae) é um mosquito vetor de diversos patógenos causadores de doenças importantes como Zika e dengue. Aspectos do comportamento dos mosquitos têm papel importante na dinâmica das doenças transmitidas por eles e, por isso, uma área particularmente relevante é o estudo dos ritmos circadianos. Apesar da sua importância médica, pouco sabemos sobre o controle molecular dos ritmos circadianos de mosquitos. Os genes de relógio já são descritos em mosquito, porém ainda não se sabe como esses genes interagem entre si. A caracterização funcional dos genes nos indivíduos torna-se especialmente difícil devido à falta de ferramentas genéticas tais como aquelas disponíveis no modelo Drosophila melanogaster. A fim de entendermos como os genes de relógio funcionam, procuramos estabelecer o modelo de cultura de células para o estudo circadiano. Vimos que a linhagem celular embrionária Aag2 de Ae. aegypti expressa os principais genes de relógio e estudos anteriores demonstraram que esta linhagem constitui um bom modelo para estudos imunológicos por responderem de forma semelhante ao que ocorre no mosquito Deste modo, caracterizamos o perfil de expressão circadiana dos genes de relógio na linhagem Aag2 por PCR quantitativo em tempo real em células não infectadas em diferentes fotoperíodos (claro/escuro \2013 LD12:12 e escuro constante \2013 DD) e em células infectadas com DENV2 em LD12:12. Dos dez genes de relógio analisados, apenas per apresentou um perfil de expressão cíclico nessas células, no regime de LD12:12. Já em DD, todos os genes apresentaram um perfil arrítmico de expressão, sugerindo então que o Zeitgeber luz é um importante sincronizador ambiental do relógio para essas células. Durante a padronização da infecção pelo DENV2, vimos que a ausência de soro no meio de cultura, necessário para a realização da infecção é prejudicial, pois há uma redução no número de células da cultura. Por fim, em células infectadas com DENV2 vimos que nenhum gene apresentou um perfil de expressão cíclico, o que nos sugere que para as células Aag2 talvez seja necessária a sincronização do ciclo celular, para que haja um perfil de ciclagem, tal como ocorre em células de mamíferos quando sincronizadas.