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ANÁLISE DO ENVOLVIMENTO DO INTERFERON TIPO I NA IMUNOPATOGÊNESE DO ERITEMA NODOSO HANSENIANO
Rodrigues, Thaís Fernanda | Fecha del documento:
2019
Director
Afiliación
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Resumen en portugues
A forma multibacilar da hanseníase pode apresentar manifestações inflamatórias agudas, conhecidas como episódios reacionais. Um desses episódios é o eritema nodoso hanseniano (ENH), considerado o quadro clínico mais grave da hanseníase, sendo caracterizado pelo aparecimento abrupto de múltiplas lesões novas, sintomas sistêmicos e agravamento da neuropatia. A talidomida é o fármaco de escolha para o tratamento e tem efeito benéfico num curto período de tempo. Dados recentes do nosso grupo demonstram uma maior expressão de TLR-9, tanto nas lesões como no sangue de pacientes ENH. Uma consequência importante da ativação da via de TLR-9 é a produção de IFN tipo I, especialmente o IFN-\03B1. Essa citocina tem sido implicada na patogênese de várias doenças inflamatórias crônicas com intercorrências agudas, como a psoríase e o lúpus eritematoso sistêmico, contribuindo para uma desregulação da imunidade inata e adquirida e amplificação do processo inflamatório. Baseado nos dados acima citados, este estudo teve como objetivo analizar a participação de IFN-I na patogênese do ENH. Para alcançar este objetivo, amostras de sangue e lesões de pele de pacientes com as formas multibacilares sem reação (grupo LL/BL) e com diagnóstico da reação antes de iniciar o tratamento com talidomida (grupo ENH D0) foram coletadas. Também analisamos amostras clínicas de pacientes ENH após 7 dias de tratamento com talidomida (grupo ENH D7) para avaliar o impacto deste medicamento na via de IFN-I. Foram realizados ensaios de imunofluorescência e PCR em tempo real para investigar, respectivamente, a presença de IFN-\03B1 e a expressão de genes de assinatura de IFN-I (EIF2AK2, MX1 e IFIT-1) Além disso, os níveis da proteína MX1 na lesão cutânea foram analisados através de western blotting. Os resultados de expressão gênica indicam níveis mais elevados de RNAm de EIF2AK2 tanto na lesão cutânea como no sangue de pacientes ENH D0. Já no que se refere aos genes MX1 e IFIT-1 não houve diferença entre os grupos. O tratamento com a talidomida resultou na diminuição da expressão dos genes EIF2AK2 e MX1. Os níveis proteicos de MX1 se mostraram elevados nos pacientes LL/BL e ENH D0, com uma diminuição após o tratamento com a talidomida. Imagens de imunofluorescência sugerem a presença de um maior número de células produtoras de IFN-\03B1 nas lesões de pacientes ENH D0 quando comparadas a LL/BL, ocorrendo uma diminuição drástica após 7 dias de tratamento com talidomida. Finalmente, confirmamos que o IFN-\03B1 possui a capacidade de induzir a NETose em neutrófilos de indivíduos sadios. Em conjunto esses resultados sugerem o envolvimento do IFN do tipo I na patogênese do ENH, abrindo perspectivas para a identificação de biomarcadores para o diagnóstico precoce do ENH e novos alvos para melhor conduta terapêutica deste episodio reacional.
Resumen en ingles
The course of multibacillary leprosy may be interrupted by acute inflammatory episodes known as leprosy reactions. Erythema nodosum leprosum (ENL) is considered the most severe reactional episode, being characterized by the abrupt onset of multiple new lesions and systemic symptoms and worsening of neuropathy. Thalidomide is the drug of choice for ENL treatment with a beneficial effect in a short time period. Recent data from our group have shown an increased TLR-9 expression in both the lesions and in the circulating mononuclear cells of ENL patients. Moreover, the serum levels of endogenous DNA-histone and mycobacterial DNA-histone complexes, which are TLR-9 ligands, were also high in ENL patients. An important consequence of the activation of the TLR-9 pathway is the production of type-I interferon (IFN-I). This cytokine has been shown to play a key role in the pathogenesis of several chronic inflammatory diseases with acute intercurrences such as psoriasis and systemic lupus erythematosus. Based on the above-mentioned data, this study aimed to analyze the participation of IFN-I in the pathogenesis of ENL. To achieve this goal, blood samples and skin lesions from unreactional multibacillary patients (LL / BL group) and patients diagnosed with ENL before starting thalidomide treatment (ENL D0 group) were collected. We also analyzed clinical samples from ENL patients after 7 days of thalidomide treatment (ENL D7 group) to assess the impact of thalidomide on the IFN-I pathway. Immunofluorescence and real-time PCR assays were performed to investigate, respectively, the presence of IFN-\03B1 and the expression of IFN-I signature genes (IFIT-1, MX-1 and EIF2AK2) In addition, MX1 protein levels in the skin lesion were analyzed by western blotting. Our gene expression data indicate higher levels of EIF2AK2 mRNA in both skin lesions and blood of ENH D0 patients. Regarding the expression of MX1 and IFIT1 genes, no difference between the groups was observed. Thalidomide treatment resulted in decreased expression of EIF2AK2 and MX1 genes. Protein levels of MX1 were elevated in LL/BL patients and ENL D0, with a decrease after thalidomide treatment. Immunofluorescence images suggested the presence of a greater number of IFN-\03B1 producing cells in the lesions of ENL D0 patients compared to LL/BL, and with a drastic decrease in production after 7 days of thalidomide treatment. Finally, we confirmed that IFN-\03B1 has the ability to induce NETose in neutrophils from healthy individuals. Taken together, our data suggest the involvement of type I IFN in the pathogenesis of ENL, with perspectives for the identification of biomarkers for early diagnosis and new therapeutic targets for a better management of this reactional episode.
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