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FALSE POSITIVE REACTION DUE TO ENDOGENOUS BIOTIN ACTIVITY IN GLANDULAR EPITHELIUM OF DECIDUA
Epitélio glandular da decídua
Sondas biotiniladas
Hibridização in situ
Citomegalovirus
Glandular epithelium of decidua
Biotinylated probes
In situ hybridisation
Citomegalovirus
Autor
Afiliación
Universidade Federal do Espírito Santo. Centro de Biomédico. Departamento de Patologia e Núcleo de Doenças Infecciosas. Vitória, ES, Brasil.
Universidade Federal do Espírito Santo. Centro de Biomédico. Departamento de Patologia e Núcleo de Doenças Infecciosas. Vitória, ES, Brasil / Universidade Federal do Espírito Santo. Hospital Universitário Cassiano Antônio de Moraes. Laboratório de Patologia. Vitória, ES, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Departamento de Virologia. Laboratório de Virologia Comparada. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Universidade Federal Fluminense. Instituto Biomédico. Departamento de Microbiologia e Parasitologia. Niterói, RJ, Brasil.
Universidade Federal do Espírito Santo. Centro de Biomédico. Departamento de Patologia e Núcleo de Doenças Infecciosas. Vitória, ES, Brasil / Universidade Federal do Espírito Santo. Hospital Universitário Cassiano Antônio de Moraes. Laboratório de Patologia. Vitória, ES, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Departamento de Virologia. Laboratório de Virologia Comparada. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Universidade Federal Fluminense. Instituto Biomédico. Departamento de Microbiologia e Parasitologia. Niterói, RJ, Brasil.
Resumen en portugues
Sondas marcadas com biotina foram utilizadas neste trabalho para detecção de infecção viral por hibridização in situ em tecidos fixados com formalina e embebidos em parafina de 11 casos obtidos de abortamento. Sondas para citomegalovírus humano (HCMV), parvovírus B19 humano (B19) e adenovírus humano tipo 2 (HAd2), foram marcadas com biotina-11-dUTP através da reação de nick-translation. Estreptavidina conjugada com fosfatase alcalina (SAP) seguida por solução de 4-nitro-azul de tetrazolio/5-bromo-4-cloro-3-indolil fosfato (NBT/BCIP) foram utilizadas para detecção da biotina após a reação de hibridização. Reação positiva foi observada no núcleo de células do epitélio glandular da decídua tanto no controle positivo quanto no negativo em tecidos de primeiro e segundo trimestre gestacional. Esta reação não foi inibida com solução bloqueadora da atividade endógena de fosfatase alcalina e persistiu mesmo com a omissão das sondas. O uso de controles negativos permitiu revelar atividade endógena de biotina nuclear em epitélio glandular da decídua, responsável por reações falso positivas em sistemas de detecção estreptavidina-biotina (StrepABC). Os resultados obtidos neste estudo fortemente recomendam que a detecção de ADN por hibridização in situ em endométrio gestacional seja feita com outro sistema de detecção que não o StrepABC.
Resumen en ingles
Biotin-labeled probe was used in an in situ hybridisation assay to localize virus infection in formalin-fixed, paraffin embedded tissues taken from eleven abortion cases. Probes for human cytomegalovirus (HCMV), human Parvovirus B19 (B19) and human adenovirus type 2 (HAd2), were labeled with biotin-11-dUTP by nick-translation reaction. Streptavidin-alkaline-phosphatase (SAP) was used to detect biotin, followed by 4-nitroblue tetrazolium/5-bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate (NBT/BCIP) solution. Positive reaction was observed in nucleus of glandular ephitelium cells of decidua either in positive or in negative control at first and second gestational trimester. The reaction was not inhibited with blocking solution for alkaline phosphatase endogenous activity and it persisted even with probes omission. The use of adequate negative control permitted to reveal the presence of nuclear biotin in glandular epithelium of decidua, responsible for false positivity in detection systems involving streptavidin biotin system (StrepABC). The stained cells resembled to cytophatic effect due to herpesvirus, which could induce further misinterpretation. The results obtained in this study strongly recommend that DNA detection by in situ hybridisation reaction in gestational endometrium should be done without using StrepABC system.
Palabras clave en portugues
Biotina endógenaEpitélio glandular da decídua
Sondas biotiniladas
Hibridização in situ
Citomegalovirus
Palabras clave en ingles
Endogenous biotinGlandular epithelium of decidua
Biotinylated probes
In situ hybridisation
Citomegalovirus
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