Desenvolvimento de ferramentas moleculares rápidas e de baixo custo para o diagnóstico do vírus Zika

Abstract

A rápida disseminação do vírus Zika (ZIKV) representa um problema de saúde pública global, especialmente em países onde circulam várias espécies de mosquitos vetores e apresentam condições favoráveis para a transmissão de vírus, como o Brasil. Nessas áreas, a melhoria no controle do mosquito precisa ser uma prioridade, mas a vigilância do vírus nos mosquitos ocorre de maneira ineficiente. Atualmente, a reação de transcriptase reversa seguida da reação em cadeia da polimerase quantitativa (qRT-PCR) é o método padrão-ouro para o diagnóstico molecular do ZIKV em amostras humanas e amostras de mosquitos. Porém, essa técnica apresenta elevado custo e inúmeras limitações para o diagnóstico Pointof- care (POC), o que dificulta sua aplicação e utilização para um grande número de amostras e em regiões com infraestrutura laboratorial limitada. Diante desse cenário, permanece a necessidade do desenvolvimento de novas plataformas que sejam capazes de detectar o ZIKV de forma simples e prática no campo. Neste trabalho, foi desenvolvida e validada uma plataforma de transcriptase reversa seguida de amplificação isotérmica mediada por alça (RTLAMP) para a detecção de ZIKV em amostras de mosquitos. Quanto aos resultados, o ensaio RT-LAMP foi altamente específico para detecção do ZIKV e se mostrou até 10.000 vezes mais sensível que a qRT-PCR para a detecção do ZIKV em amostras de mosquito. A validação do ensaio foi realizada com 60 amostras de mosquitos Aedes aegypti e Culex quinquefasciatus, incluindo mosquitos artificialmente e naturalmente infectados. O RTLAMP apresentou sensibilidade de 100%, especificidade de 91,18% e acurácia geral de 95,24%. Quanto ao custo de cada reação (teste) do RT-LAMP, o valor foi um real (R$ 1,00), 40 vezes mais barato do que o qRT-PCR. A disponibilização dessas ferramentas tem grande potencial de contribuir para prevenir a propagação da doença na população e estabelecer melhores estratégias de controle para combater esse patógeno devastador.