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DETECÇÃO DE ORGANISMOS GENETICAMENTE MODIFICADOS EM ALIMENTOS: TRIAGEM POR QPCR SYBR® GREEN
Estudos de Validação
Limite de Detecção
Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real
Controle de Qualidade
Sarmento, Sylvia Kahwage | Fecha del documento:
2017
Autor
Co-director
Miembros de la junta
Afiliación
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Resumen en portugues
O crescimento constante da área mundial de cultivo de plantas geneticamente modificadas, em especial o Brasil, e o surgimento de novos eventos transgênicos têm trazido preocupações tendo em vista o aumento no número de produtos alimentícios contendo organismos geneticamente modificados (OGM) sendo comercializados, existindo ainda incertezas de como devem ser regulamentados esses produtos. Legislações e diretrizes vêm sendo criadas a fim de proteger o meio ambiente e a saúde humana como o Protocolo de Cartagena, as especificações do Codex Alimentarius para rotulagem de alimentos e de metodologias analíticas, e a Lei de Biossegurança, que regulamenta a pesquisa e o uso comercial dos OGM. Muitos países adotam políticas de rotulagem de produtos alimentícios com estabelecimento de limites da presença intencional de organismos geneticamente modificados. No Brasil, foi criado o Decreto n° 4.680/2003 em que é obrigatória a rotulagem de alimentos com mais de 1% de OGM. Laboratórios estão estudando e validando métodos para detecção e quantificação de genes modificados, que têm sido de grande importância no comércio brasileiro e internacional, especialmente em países que permitem tanto a rotulagem para a presença como para a ausência de transgênicos, com a finalidade de garantir a informação correta nas embalagens para os consumidores. A tradicional estratégia de análise de OGM em alimentos consiste na detecção de dois elementos genéticos comumente utilizados nas construções (P-35S e T-nos) seguida da quantificação evento-específica. No entanto, esta estratégia encontra cada vez mais limitações pela diversidade das novas construções e complexidade dos eventos que vêm sendo desenvolvidos e comercializados. Este trabalho se propôs a implementar a detecção de 5 elementos genéticos (P-35S, T-nos, CTP-2, PAT, BAR) utilizados nas construções dos OGM presentes em alimentos de soja e milho pelo método de triagem por qPCR SYBR® Green, além de estabelecer os limites de detecção (LOD) de cada alvo. Os resultados mostraram que a qPCR SYBR® Green é uma técnica robusta e sensível na amplificação das matrizes de alimentos de soja e milho, estabelecendo limites de detecção com valores abaixo do limite de 1% descrito no Decreto n° 4.680/2003. O método de triagem empregado foi bastante viável na discriminação dos eventos de soja geneticamente modificada presentes nas amostras analisadas, enquanto que a discriminação dos eventos de milho geneticamente modificado foi menor, uma vez que foram encontrados vários possíveis eventos de milho, havendo a necessidade da inclusão de mais um elemento genético na matriz de triagem.
Resumen en ingles
The constant growth of the world-wide area of cultivation of genetically modified plants,
especially Brazil, and the emergence of new transgenic events has raised concerns
regarding the increase in the number of food products containing genetically modified
organisms (GMO) being marketed, there are still uncertainties as to how these products can
be regulated. Legislation and guidelines have been created to protect the environment and
human health such as the Cartagena Protocol, Codex Alimentarius specifications for food
labeling and analytical methodologies, and the Biosafety Law, which regulates research and
commercial use of GMO. Many countries adopt food-labeling policies with limits on the
intentional presence of genetically modified organisms. In Brazil, Decree 4.680 / 2003 was
created in which the labeling of foods with more than 1.0% of GMO is mandatory.
Laboratories are studying and validating methods for the detection and quantification of
modified genes, which have been of great importance in Brazilian and international trade,
especially in countries that allow both labeling for the presence and the absence of
transgenics, in order to guarantee the packaging information to consumers. The traditional
strategy for analyzing GMO in food consists of detecting two genetic elements commonly
used in constructs (P-35S and T-NOS) followed by event-specific quantification. However,
this strategy is increasingly constrained by the diversity of the new constructions and
complexity of the events being developed and marketed. This work is implemented in a
detection of 5 genetic elements (P-35S, T-NOS, CTP-2, PAT, BAR) used in the constructs in
addition to of GMO present in soy and corn foods by the screening method by qPCR SYBR
Green, set limits of detection (LOD) of each target. The results showed that qPCR SYBR
Green is a robust and sensitive technique for the amplification of soya and maize food
matrices, with detection limits with values below the 1% limit described in Decree
4.680/2003.The screening method employed was quite feasible in discriminating the events
of genetically modified soybean present in the analyzed samples, where as in the
discrimination of the events of genetically modified corn was not satisfactory, since most corn
events were found possible, need for the inclusion of one more genetic element in the
screening matrix.
DeCS
Alimentos Geneticamente ModificadosEstudos de Validação
Limite de Detecção
Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real
Controle de Qualidade
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