Clonagem, expressão e caracterização imunológica do gene Rv1419 de Mycobacterium Tuberculosis

Abstract

A Tuberculose (TB) é uma doença infecciosa causada por um patógeno exclusivamente humano, o Mycobacterium Tuberculosis (Mtb). Nosso objetivo foi avaliar se uma nova lectina do Mtb, Rv1419p, apresenta um papel modulatório em macrófagos J774 in vitro assim como investigamos a resposta imune celular de pacientes com Tuberculose a essa proteína. Um banco de dados de lectinas, de diferentes espécies, foi construído para a mineração das sequências de proteínas hipotéticas que foram geradas a partir da análise de genoma de M. Tuberculosis H37Rv. Identificamos uma proteína hipotética codificada pelo gene Rv1419 e produzimos a proteína recombinante. Observamos que a produção de TNF-a induzida pela proteína recombinante foi dependente do tempo e da dose, mas independente do domínio lectínico. Observamos também por imunofluorescência que a proteína recombinante foi capaz de interagir com a superfície celular de macrófagos J774 em cultura. Em adição, observamos que níveis detectáveis de citocinas Th1 (IFN-y e THF-a) e Th2 (IL-10) foram secretadas por CMSP de pacientes com Tuberculose em resposta a proteínas do filtrado de cultura do bacilo (CFP) e à proteína recombinante, demonstrando que a Rv1419p é capaz de induzir uma resposta imune celular em pacientes com Tuberculose.