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https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/34198
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DissertaçãoDireito Autoral
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APLICABILIDADE DOS GENES PRÉ-S DO VIRUS DA HEPATITE B (VHB) NOS ESTUDOS DE DIVERSIDADE GENÔMICA
Silva Filho, Hermes Pedreira da | Data do documento:
2005
Autor(es)
Orientador
Membros da banca
Afiliação
Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / Universidade Federal da Bahia. Faculdade de Medicina. Salvador, BA, Brasil.
Resumo
O estudo da diversidade genômica e do perfil molecular dos genes pré-S e S em isolados do VHB foi realizado com a utilização de técnicas da PCR (Polymerase chain reaction) e sequenciamento de DNA. Para genotipagem e análises filogenéticas utilizamos 40 amostras do norte e nordeste do Brasil, selecionadas aleatoriamente de pacientes portadores do VHB: 28 pacientes positivos para o AgHBe, na fase aguda da infecção e provenientes de 8alvador-BA; 12 pacientes positivos para o AgHBs, na fase crônica da infecção e provenientes de Rio Branco AC. O DNA do VHB foi detectado por Nested-PCR utilizando-se primers específicos para as regiões pré-S e S. Os produtos amplificados foram seqüenciados e suas seqüências foram analisadas utilizando os programas Phred/phrap e ABI Prism 8EQSCAPE (Applied Biosystems). O alinhamento foi realizado pelo programa ClustalX (v.1.83) e análises filogenéticas foram realizadas pelos programas Mega3 e PAUP. Das 40 amostras oriundas da região norte e nordeste do Brasil, 57,5%(23/40) foram detectáveis por PCR e seqüenciadas. Das amostras provenientes do norte do Brasil verificamos uma diversidade genotípica; com a identificação dos genótipos A (55,6%), D (22,2%) e F (22,2%). Foi demonstrado, também, que na região nordeste, na qual temos poucos estudos dos aspectos genômicos do VHB, a presença do genótipo A (85,7%) e F (14,3%). No estudo destas amostras foram encontrados os seguintes sítios de mutações na região 8 do vírus: P49R, S61L, 186T e L109P, estando esta última na segunda alça imunodominante da proteína 8 (small protein) do envelope viral. Foram identificadas, também, mutações na região pré-S: G02E, Y129H, A79L, e a mutação 885P no elemento regulatório da região promotora do gene S (AgHBs); A mudança do nucleotídeo ocorreu sempre na primeira ou segunda posição do códon, reforçando a hipótese de seleção positiva. Estes resultados corroboram com estudos de mutações nas regiões pré-S/S do VHB e evidenciam a necessidade de se estabelecer uma vigilância molecular com o intuito de identificar a prevalência de mutações nas diversas regiões brasileiras, buscando relacioná-las aos genótipos circulantes diferentes formas de evolução da doença e impacto da vacina. A detecção de mutantes do AgHBs pode, ainda, ser extremamente útil para testes diagnósticos do VHB em doadores de sangue e órgãos.
Resumo em Inglês
The study of genomic diversity of the Hepatitis B Virus (HBV) and the molecular profile of the genes pre-S and S was done with PCR techniques (Polymerase Chain Reaction) and DNA sequencing, in isolated individual carriers of the virus. For phylogenetic analyses and genotyping, we used samples from the North and Northeast of Brazil, randomly selecting 40 sera samples from carriers of HBV; 28 positive HBeAg, patients with acute infection, from Salvador-BA and 12 positive HBsAg, in chronic phase, from Rio Branco-AC. The HBV-DNA was detected by Nested-PCR using specific primers for the pre-S and S regions. The amplified products were sequenced, and were analyzed with the program Phred/phrap and the ABI Prism SEQSCAPE Software versão 2,1 (Applied Biosystems). Alignment was performed by ClustalX (v.1.83) program and phylogenetic analysis was done with the programs Mega3 and PAUP. From the 40 samples from the Northeast and Northeastern regions of Brazil, 57, 5% (23/40) were detectable by PCR and were sequenced. From the samples from the North of Brazil, we found some genotypic diversity, and identifiied the genotypes A (55, 6%), D (22, 2%) and F (22, 2%). We also show that in the Northeastern region, where there are few studies about the genomic aspects of HBV, that we have both genotypes A (85, 7%) and F (14, 3%). In these populations we found the following sites of mutations on the S region of the virus; P49R, S61L, I86T and L109P. The final mutation site above is the last one on the second immune-dominant loop of the viral envelope protein. Mutations were also identified on the pre-S region; G02E, Y129H, A79L, and S85P on the region provider of the gene S (HBsAg). All nucleotideos changes had occurred in to first and second codon position, reinforcing the positive selection pressure hypothesis. These findings corroborate with mutations studies about HBV pre-S/S regions and highlight the need for surveillance programs to address questions as such prevalence of mutations related to specific genotypes, clinical outcome and vaccine impact in same Brazilians regions. The detection of HBsAg could be a useful tool for HBV screening tests in blood donors and organ donos.
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