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PROTOCOLO DE PURIFICACIÓN EN DOS ETAPAS DE FOSFOLIPASAS A2 A PARTIR DE LA ANÉMONA MARINA CONDYLACTIS GIGANTEA
Phospholipase A2
Condylactis gigantea
Sea anemone
Protein purification
Fosfolipasa A2
Anémona marina
Condylactis gigantea
Purificación de proteínas
Titulo alternativo
A Two-Step Purification Procedure of Phospholipases A2 from the Sea Anemone Condylactis giganteaAutor
Afiliación
Universidad de Oriente. Facultad de Ciencias Naturales. Santiago de Cuba, Cuba.
Universidad de La Habana. Facultad de Biología. Centro de Estudio de Proteínas. Ciudad Habana, Cuba.
Instituto de Catálisis y Petroleoquímica. Madrid, España.
Universidad de La Habana. Facultad de Biología. Centro de Estudio de Proteínas. Ciudad Habana, Cuba.
Universidad de La Habana. Facultad de Biología. Centro de Estudio de Proteínas. Ciudad Habana, Cuba.
Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Estudos de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Universidade Federal de Rondônia. Departamento de Medicina. Porto Velho, RO, Brasil.
Universidad de La Habana. Facultad de Biología. Centro de Estudio de Proteínas. Ciudad Habana, Cuba.
Universidad de La Habana. Facultad de Biología. Centro de Estudio de Proteínas. Ciudad Habana, Cuba.
Instituto de Catálisis y Petroleoquímica. Madrid, España.
Universidad de La Habana. Facultad de Biología. Centro de Estudio de Proteínas. Ciudad Habana, Cuba.
Universidad de La Habana. Facultad de Biología. Centro de Estudio de Proteínas. Ciudad Habana, Cuba.
Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Estudos de Biomoléculas Aplicadas à Saúde. Universidade Federal de Rondônia. Departamento de Medicina. Porto Velho, RO, Brasil.
Universidad de La Habana. Facultad de Biología. Centro de Estudio de Proteínas. Ciudad Habana, Cuba.
Resumen en ingles
Marine coelenterate venom is composed of complex mixtures of several substances, mainly of proteins, for which phospholipase A2 activity has been described. This research study aims to test a two-step purification procedure for phospholipases A2 (PLA2) to filter enzymes for further characterization. PLA2 purification from the sea anemone Condylactis gigantean is conducted through a chromatographic affinity support MANA - Sepharose CL 4B with covalently immobilized phosphatidylcholine egg. The phospholipase A2 activity was corroborated by using qualitative TLC and a fluorogenic substrate. By means of the above-mentioned support, purification of three protein-based components can be carried out. These components are produced with molecular weights between 18000 and 14000, and at least one component possessing phospholipase A2 activity.
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El veneno de los celenterados marinos constituyen mezclas complejas de varios componentes, muchos de naturaleza proteica, y para los cuales se ha descrito la actividad fosfolipásica A2. El objetivo de la presente investigación fue purificar las fosfolipasas A2 (FLA2) procedentes de la anémona marina Condylactis gigantea a partir de un protocolo de dos etapas para su posterior caracterización. Se muestra la purificación de FLA2 en un soporte cromatográfico de afinidad con fosfatidilcolina de huevo inmovilizada covalentemente para la purificación de fosfolipasas A2, a los que se les comprobó cualitativamente la actividad fosfolipásica A2 por cromatografía en placa (TLC) utilizando sustrato marcado con fluorescencia. Dicho soporte cromatográfico permite que en un protocolo de purificación de solamente dos pasos se obtengan tres componentes proteicos de pesos moleculares entre 18000 y 14000, con al menos un componente que posee actividad fosfolipásica A2.
Palabras clave en ingles
AffinityPhospholipase A2
Condylactis gigantea
Sea anemone
Protein purification
Palabras clave
Cromatografía de afinidadFosfolipasa A2
Anémona marina
Condylactis gigantea
Purificación de proteínas
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