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AVALIAÇÃO DA CITOTOXICIDADE DO VENENO DE BOTHROPS LEUCURUS E TOXINAS ISOLADAS EM LINHAGENS CELULARES DE GLIOMAS
Rosário, Mila de Oliveira Hughes Veiga do | Fecha del documento:
2018
Director
Co-director
Miembros de la junta
Afiliación
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / Universidade Federal da Bahia. Faculdade de Medicina. Salvador, BA, Brasil.
Resumen en portugues
Gliomas são os tumores do sistema nervoso central com prognóstico extremamente desfavorável necessitando o desenvolvimento de drogas mais eficazes.OBJETIVO: avaliar o potencial antitumoral do veneno total, frações cromatográficas e algumas proteínas de interesse provenientes do veneno de Bothrops leucurus, um viperídeo amplamente distribuído no nordeste brasileiro em linhagens celulares de gliomas. MATERIAL E MÉTODOS: As frações que exibiram atividade antitumoral para células C6 e U251 foram purificadas por cromatografia e as proteínas foram identificadas por espectrometria de massa. As frações cromatográficas foram testadas quanto à pureza por eletroforese em gel de poliacrilamida. A viabilidade celular foi avaliada pelo ensaio de MTT e o tipo de morte celular por citometria de fluxo, com dupla marcação celular por anexina V e iodeto de propídio após tratamentos. A morfologia das células foi observada por microscopia de contraste de fase. RESULTADOS E DISCUSSÃO: O tratamento com o veneno total demonstrou uma citotoxicidade dependente da concentração mais relevante para as células tumorais do que para os astrócitos. Diminuição da celularidade e alterações morfológicas foram observadas. O veneno total a 3 μg/mL matou as células de tumor por necrose, mas não induziu a morte de astrócitos. Ensaios de citotoxicidade foram realizados para as frações cromatográficas e as proteínas relevantes foram purificadas. A metaloprotease P-III leucurolisina-b demonstrou uma citotoxicidade dependente da concentração para células de tumor de glioma de rato C6 apresentando a mediana da EC50 de 1,44 μg/mL (variação: 1,29-1,48 μg/mL; n = 3) e de 2,25 μg/mL (variação: 2,07-2,49 μg/mL; n = 3)para células de glioblastoma humano U251. Além disso, esta proteína não afetou a viabilidade de astrócitos. A principal causa de morte celular foi apoptose. A fosfolipase A2 básica demonstrou uma citotoxicidade dependente da concentração para células de tumor C6 apresentando a mediana da EC50 de 30,00 μg/mL (variação: 27,36-32,16 μg/mL; n = 3) e de 39,81 μg/mL (variação: 38,12-41,86 μg/mL; n = 3) para células U251. Esta proteína também não afetou a viabilidade dos astrócitos. No entanto, a principal causa de morte celular foi devido a necrose. CONCLUSÕES: Estes resultados demonstram um enorme potencial para a concepção e desenvolvimento de novos medicamentos anticancerígenos derivados de proteínas do veneno de Bothrops leucurus.
Resumen en ingles
INTRODUCTION: Gliomas are tumors of the central nervous system with extremely
unfavorable prognosis necessitating the development of more effective drugs.
OBJECTIVE: To evaluate the antitumor potential of total venom, chromatographic
fractions and some proteins of interest from Bothrops leucurus venom, a viper that is
widely distributed in Brazilian northeast, to glioma cell lines. MATERIALS AND
METHODS: Fractions that exhibited antitumor activity to C6 and U251 cell lines were
further purified by chromatography and proteins were identified by mass spectrometry.
Chromatographic fractions were tested for purity by polyacrylamide gel
electrophoresis. Cell viability was evaluated by the MTT assay, and the type of cell
death, by flow cytometry, double labeling cells with annexin V and propidium iodide
after treatments. The cell morphology was observed by phase contrast microscopy.
RESULTS AND DISCUSSION: Treatment with total venom demonstrated a
concentration- dependent cytotoxicity more relevant to tumor cells than to astrocytes.
A decreased in the cellularity and morphological changes were observed. Total venom
at 3 μg/mL killed tumor cells by necrosis, but this did not induce cell death to astrocytes.
Cytotoxicity tests were performed for chromatographic fractions and the relevant
proteins were purified. The metalloprotease P-III leucurolysin-b demonstrated a
concentration-dependent cytotoxicity to tumor cells presenting a median EC50 of 1.44
μg/mL (Range: 1.29-1.48 μg/mL; n=3) to rat C6 glioma cells and of 2.25 μg/mL (Range:
2.07-2.49 μg/mL; n=3) to U251 human glioblastoma cells. Furthermore, this protein did
not affect the astrocytes viability. The main cause of cell death was apoptosis. Basic
phospholipase A2 demonstrated a concentration-dependent cytotoxicity to tumor cells
presenting a median EC50 of 30.00 μg/ml (Range: 27.36-32.16 μg/mL; n=3) to C6 cells
and of 39.81 μg/ml (Range: 38.12-41.86 μg/mL; n=3) to U251 cells. This also did not
affect the viability of astrocytes. However, the main cause of cell death was due to
necrosis. CONCLUSIONS: These results demonstrate an enormous potential for the
design and development of new anticancer drugs derived from proteins of the Bothrops
leucurus venom.
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