Avaliação da citotoxicidade do veneno de bothrops leucurus e toxinas isoladas em linhagens celulares de gliomas

Abstract

Gliomas são os tumores do sistema nervoso central com prognóstico extremamente desfavorável necessitando o desenvolvimento de drogas mais eficazes.OBJETIVO: avaliar o potencial antitumoral do veneno total, frações cromatográficas e algumas proteínas de interesse provenientes do veneno de Bothrops leucurus, um viperídeo amplamente distribuído no nordeste brasileiro em linhagens celulares de gliomas. MATERIAL E MÉTODOS: As frações que exibiram atividade antitumoral para células C6 e U251 foram purificadas por cromatografia e as proteínas foram identificadas por espectrometria de massa. As frações cromatográficas foram testadas quanto à pureza por eletroforese em gel de poliacrilamida. A viabilidade celular foi avaliada pelo ensaio de MTT e o tipo de morte celular por citometria de fluxo, com dupla marcação celular por anexina V e iodeto de propídio após tratamentos. A morfologia das células foi observada por microscopia de contraste de fase. RESULTADOS E DISCUSSÃO: O tratamento com o veneno total demonstrou uma citotoxicidade dependente da concentração mais relevante para as células tumorais do que para os astrócitos. Diminuição da celularidade e alterações morfológicas foram observadas. O veneno total a 3 μg/mL matou as células de tumor por necrose, mas não induziu a morte de astrócitos. Ensaios de citotoxicidade foram realizados para as frações cromatográficas e as proteínas relevantes foram purificadas. A metaloprotease P-III leucurolisina-b demonstrou uma citotoxicidade dependente da concentração para células de tumor de glioma de rato C6 apresentando a mediana da EC50 de 1,44 μg/mL (variação: 1,29-1,48 μg/mL; n = 3) e de 2,25 μg/mL (variação: 2,07-2,49 μg/mL; n = 3)para células de glioblastoma humano U251. Além disso, esta proteína não afetou a viabilidade de astrócitos. A principal causa de morte celular foi apoptose. A fosfolipase A2 básica demonstrou uma citotoxicidade dependente da concentração para células de tumor C6 apresentando a mediana da EC50 de 30,00 μg/mL (variação: 27,36-32,16 μg/mL; n = 3) e de 39,81 μg/mL (variação: 38,12-41,86 μg/mL; n = 3) para células U251. Esta proteína também não afetou a viabilidade dos astrócitos. No entanto, a principal causa de morte celular foi devido a necrose. CONCLUSÕES: Estes resultados demonstram um enorme potencial para a concepção e desenvolvimento de novos medicamentos anticancerígenos derivados de proteínas do veneno de Bothrops leucurus.