Caracterização proteômica e avaliação de toxicidade de plantas hipoglicemiantes: estudo dos extratos protéicos de Bauhínias e Chrysobalanus icaco

Abstract

O uso de plantas medicinais é uma forma opcional de tratamento aos pacientes diabéticos. A maioria das plantas utilizadas como antidiabéticas, ao serem avaliadas farmacologicamente demonstraram ter efeito hipoglicemiante, entretanto não se pode prescindir da avaliação dos efeitos terapêuticos sem que se conheça as propriedades toxicológicas. A proteômica abre novas perspectivas na biologia de plantas, por ser uma tecnologia que pode indicar biomarcadores que diferenciem espécies. No entanto, não há estudo proteômico utilizando espécies nativas brasileiras. O objetivo do estudo foi caracterizar as proteínas das plantas utilizadas na medicina popular como hipoglicemiantes a pata-de-vaca (Bauhinia forficata e Bauhinia variegata) e o abajerú (Chrysobalanus icaco), diferenciando as espécies pelas proteínas expressas e testando a citotoxicidade dos extratos proteicos. Verificou-se que uma outra espécie é vendida no lugar de C. icaco, a Eugenia astringens, a qual apresentou proteínas diferenciadas e seu extrato proteico se mostrou tóxico. Para a extração das proteínas, o método mais adequado para a secagem e moagem das plantas foi a liofilização e a maceração mecânica (moinho) e o antioxidante testado que mostrou maior eficiência foi o ditiotreitol (100 mmol L1 ). Bandas eletroforéticas foram visualizadas em gel de poliacrilamida, a maioria na faixa de 50 kDa. Proteínas foram digeridas em solução com tripsina pelo método de preparo de amostra auxiliada por filtro (FASP). Rendimento da extração e digestão de proteínas foi avaliado pelo método de Lowry, certificando que os resultados foram satisfatórios. Peptídeos foram analisados por cromatografia líquida com espectrometria de massas sequencial (LC-MS/MS) para a caracterização de proteínas nas amostras. No total, foram 442 identificações, sendo 131 proteínas diferentes. As principais funções biológicas das proteínas identificadas foram a respiração celular, transporte, metabolismo e fotossíntese. Proteínas semelhantes à insulina não foram identificadas em nenhuma amostra. As concentrações de glutationa e metalotioneína indicam, provavelmente, resposta ao estresse oxidativo, o qual pode ser pelas características ambientais e/ou pela contaminação por metais. Os ensaios de citoxicidade mostraram que com o aumento da concentração do extrato proteico, a viabilidade dos fibroblastos diminui. Somente o extrato de E. astringens apresentou citotoxicidade em todas as concentrações, além de reduzir a migração dos fibroblastos. Os resultados obtidos neste estudo são o princípio para a caracterização do proteoma de plantas medicinais e mostram a importância na Saúde Pública, já que o uso de plantas medicinais e fitoterápicos pode se tornar equivocado.