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MICROBIÓPSIA DE PELE NA AVALIAÇÃO DA CAPACIDADE DE TRANSMISSÃO DE CÃES INFECTADOS POR LEISHMANIA INFANTUM AO INSETO VETOR E NO DIAGNÓSTICO DA LEISHMANIOSE VISCERAL CANINA
Mota, Tiago Feitosa | Data do documento:
2018
Título alternativo
Role of skin microbiopsy in the evaluation of the infectiousness of dogs infected with L. infantum and in the diagnosis of canine visceral leishmaniasisAutor(es)
Orientador
Coorientador
Membros da banca
Afiliação
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil.
Resumo
INTRODUÇÃO: A leishmaniose visceral é uma zoonose negligenciada de importância global. Nas Américas é causada por protozoários da espécie Leishmania infantum, e transmitida por meio da picada de flebotomíneos da espécie Lutzomyia longipalpis. O cão é o principal hospedeiro no meio urbano e quando infectado possui alta carga parasitária na pele, favorecendo seu papel na transmissão do parasito ao vetor. Assim, torna-se importante a realização de estudos para avaliar sua capacidade de transmissão ao vetor. A única técnica utilizada na avaliação da transmissibilidade é o xenodiagnóstico, que é muito laborioso, tem custo elevado e baixa sensibilidade. A microbiópsia de pele (MB) pode ser uma alternativa mais rápida e simples para sua substituição, dado que coleta tecido cutâneo e sanguíneo como ocorre na picada de flebotomíneos. A MB também pode ser uma alternativa promissora para ser utilizada no diagnóstico da leishmaniose visceral canina (LVC) por ser menos invasiva que a biópsia convencional de pele (BC), podendo ser realizada em qualquer sitio anatômico onde a BC não é indicada devido ao risco de lesões e sangramentos. OBJETIVO: Avaliar a utilização da MB como alternativa para o xenodiagnóstico na avaliação da transmissibilidade e como alternativa para o diagnóstico da LVC frente a BC. MÉTODO: A MB foi realizada em diversos locais como patas, região escapular, orelhas, focinho e áreas de alopecia de 26 animais naturalmente infectados e seus resultados foram comparados aos obtidos na qPCR de aspirado esplênico e BC. Foram realizados xenodiagnósticos, BCs na região escapular esquerda e MB no focinho, abdômen e face interna da orelha esquerda de outros 35 cães infectados por L. infantum. Todos os animais foram classificados em sintomáticos e assintomáticos por meio de um sistema de escore clínico. Os flebotomíneos utilizados no xenodiagnóstico foram mantidos no insetário e dissecados em dois momentos, no 2° ou 3° dia e entre o 8° e 10° dia, com observação direta sob microscopia óptica (40x) dos intestinos médios na busca por formas promastigotas de L. infantum. As amostras de pele obtidas nas MBs e BCs tiveram o seu DNA extraído e foi realizada qPCR buscando o kDNA do parasita. As positividades dos testes foram comparadas utilizando o teste exato de Fisher e o índice kappa. A carga parasitária obtida nas MBs positivas dos dois grupos de animais foi correlacionada pelo teste de Kruskal-Wallis. RESULTADOS: Não houve diferença estatística entre a sensibilidade da qPCR da MB, do aspirado esplênico e BC. Da mesma forma a positividade no xenodiagnóstico não foi diferente dentre as classificações clínicas. A MB detectou mais animais positivos em comparação ao xenodiagnóstico de forma estatisticamente significante (p < 0,05). Não houve diferença significativa entre a carga parasitária da MB e BC. CONCLUSÃO: A MB pode vir a ser utilizada como alternativa para o diagnóstico da LVC pois é tão sensível quanto a BC e pode auxiliar na identificação de locais da pele do cão onde o xenodiagnóstico terá maior sensibilidade. Ela também pode substituir o xenodiagnóstico na avaliação da ingesta do parasito que antecede a defecação do flebotomíneo após o repasto sanguíneo.
Resumo em Inglês
INTRODUCTION: Visceral leishmaniasis is a neglected zoonosis of global importance. In the Americas it is caused by protozoa of the species Leishmania infantum, and transmitted by the bite of sandflies of the species Lutzomyia longipalpis. The dog is the main host in the urban area and when infected has high parasite load in the skin, favoring its role in the parasite
transmission. Thus, it is important to carry out studies to evaluate its transmission potential. The only technique used for infectiousness evaluations is the xenodiagnosis, which is very laborious, has a high cost and low sensitivity. Skin microbiology (MB) may be a quicker and
simpler alternative for its replacement, since it collects cutaneous and blood tissue as occurs in the sandfly bite. MB can also be a promising alternative to be used in the diagnosis of canine visceral leishmaniasis (CVL) because it is less invasive than conventional skin biopsy (SB), and can be performed in any anatomic site where SB is not indicated due to the risk of lesions
and bleeding. OBJECTIVE: To evaluate the use of MB as an alternative for xenodiagnosis in the infectiousness evaluation and as an alternative for the diagnosis of CVL in comparison with SB. METHODS: MB was performed in several places such as paws, scapular region, ears, muzzle and areas of alopecia of 26 naturally infected animals and their results were compared
to those obtained in qPCR of splenic aspirate and SB. Xenodiagnosis, BCs in the left scapular region and MB were performed on the muzzle, abdomen and inner face of the left ear of another 35 dogs infected with L. infantum. All animals were classified as symptomatic and asymptomatic by means of a clinical score system. The sandflies used in the xenodiagnosis were kept in the insectary and dissected in two moments, on the 2nd or 3rd day and between the 8th and 10th day, with direct observation under light microscopy (40x) of the midguts in the search for promastigote forms of L. infantum. The skin samples obtained in the MBs and SBs had their DNA extracted and qPCR was performed looking for the kDNA of the parasite.
Positive tests were compared using Fisher exact test and the kappa index. The parasite load obtained in the positive MBs of the two groups of animals was correlated by Kruskal-Wallis test. RESULTS: There was no statistical difference between the qPCR sensitivity of MB, splenic aspirate and SB. Likewise, positivity in xenodiagnosis was not different among clinical
classifications. MB detected more positive animals compared to xenodiagnosis in a statistically significant way (p <0.05). There was no significant difference between the MB and SB parasite load. CONCLUSION: MB can be used as an alternative for the diagnosis of CVL, since it is as sensitive as SB and can help in the identification of dog’s skin sites where xenodiagnosis will be more sensitive. It may also replace xenodiagnosis in the evaluation of parasite ingestion that precedes defecation of sand flies after blood meal.
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