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TRYPANOSOMA CANINUM: MONITORAMENTO DE EVENTOS MORFOBIOLÓGICOS DURANTE O PROCESSO DE INFECÇÃO NATURAL E EXPERIMENTAL
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Abstract in Portuguese
Trypanosoma caninum é uma nova espécie de protozoário isolado de cão doméstico, em diferentes regiões do Brasil. O conhecimento de aspectos biológicos, pouco conhecidos, desse parasito é fundamental para entender o seu ciclo de vida. Assim, este estudo objetivou: a) caracterizar novos isolados; b) monitorar a sequência de eventos morfobiológicos em modelos in vivo e in vitro; c) descrever aspectos da infecção natural de cães. A caracterização foi realizada por nested-PCR utilizando iniciadores que amplificam uma região parcial do gene 18S rDNA cujos produtos foram sequenciados e analisados filogeneticamente. Nos ensaios in vitro foi utilizado cultivo axênico e co-cultivo com as linhagens celulares Lulo, MDCK-2 e DH-82. No ensaio in vivo, utilizamos camundongos outbread para avaliar a capacidade infectiva e investigar formas evolutivas na infecção de vertebrados através da cultura, exame direto, histopatologia e PCR. Aspectos da infecção natural foram investigados em 14 cães utilizando métodos parasitológicos, sorológicos e moleculares A identificação de novos isolados de T. caninum revelaram Barra Mansa (RJ) e São João do Piauí (PI) como duas novas áreas de ocorrência sugerindo que o número de casos da infecção natural tem se expandido no Brasil. Os estudos in vitro ajudaram a conhecer e consolidar aspectos morfobiológicos de T. caninum. Foi estabelecido que T. caninum é uma espécie polimórfica, que apresenta predominância de formas tripomastigotas quando co-cultivado com células de mamíferos, mas que não é capaz de invadir essas células. Na infecção experimental de camundongos, resultados preliminares mostraram que T.caninum pode alcançar diferentes órgãos e tecidos. Aspectos da infecção natural mostraram que cães apresentam-se assintomáticos, com baixa resposta imune humoral e infecção transitória. Além dos resultados acima, nosso estudo fornece evidências para classificação taxonômica desse parasito no subgênero Megatrypanum.
Abstract
Trypanosoma caninum is a new protozoan species isolated from domestic dogs, in different regions of Brazil. The knowledge of little known biological aspects of this parasite is crucial to understand its life cycle. Thus, this study aimed: a) to characterize new isolates; b) to monitor the sequence of morphological and biological events in in vivo and in vitro models; c) to describe the aspects of natural infection of dogs. The characterization was done by nested PCR using primers that amplify a partial region of the 18SrDNA gene whose products were sequenced and phylogenetically analyzed. In vitro assays have used axenic culture and coculture with Lulo, MDCK-2 and DH-82 cell lines. In the in vivo assay, we have used outbread mice to evaluate the infective capacity and to investigate evolutive forms in the infection of vertebrates through culture, direct examination, histopathology, and PCR. Aspects of natural infection were investigated in 14 dogs using parasitological, serological and molecular methods The identification of new isolates of T. caninum revealed Barra Mansa and São João do Piauí as two new occurrence areas suggesting that the case number of natural infection has expanded in Brazil. In vitro studies have helped to know and to consolidate morphological and biological aspects of T. caninum. It was found that T. caninum is a polymorphic species, which presents predominantly trypomastigotes when co-cultured with mammalian cells, nevertheless it is unable to invade these cells. In the experimental infection of mice, preliminary results have shown that T.caninum was able to reach different organs and tissues. Aspects of natural infection showed that dogs were asymptomatic with low humoral immune response and transitory infection. In addition to the above results, our study provides evidence for taxonomic classification of this parasite in the subgenus Megatrypanum.
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