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DEVELOPMENT OF AN ELISA FOR THE DIAGNOSIS OF REACTIVE IGE ANTIBODIES ANTI-THERAPEUTIC HORSE SERA
Hipersensibilidade
Antiveneno
Ensaio de diagnóstico
Ensaio imunológico
Peptídeo antígeno múltiplo
Ensaio de Imunoadsorção Enzimática
Antivenom
Diagnostic assay
ELISA
Hypersensitivity
Immunological assay
Multiple antigen peptide
Autor
Afiliación
Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Desenvolvimento Tecnológico em Saúde. Instituto Nacional de Ciência de Inovação e Tecnologia de Doenças Negligenciadas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório de Bioquímica Experimental e Computacional de Fármacos. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Universidade Federal Fluminense. Instituto de Biologia. Departamento de Biologia Celular e Molecular. Niterói, RJ, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório de Bioquímica Experimental e Computacional de Fármacos. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Instituto Vital Brasil. Laboratório de Pesquisa e Desenvolvimento. Niterói, RJ, Brasil.
Instituto Vital Brasil. Laboratório de Pesquisa e Desenvolvimento. Niterói, RJ, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Desenvolvimento Tecnológico em Saúde. Instituto Nacional de Ciência de Inovação e Tecnologia de Doenças Negligenciadas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório de Bioquímica Experimental e Computacional de Fármacos. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Instituto Vital Brasil. Laboratório de Pesquisa e Desenvolvimento. Niterói, RJ, Brasil.
Instituto Vital Brasil. Laboratório de Pesquisa e Desenvolvimento. Niterói, RJ, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Desenvolvimento Tecnológico em Saúde. Instituto Nacional de Ciência de Inovação e Tecnologia de Doenças Negligenciadas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Resumen en ingles
Hypersensitive diseases that involve IgE reactivity are important concern of public, especially those encompassing the potential pathogenesis from the administration of horse serum-based therapeutics such as antivenoms. A method for the definitive diagnosis of reactive IgE is important for identifying allergic patients to control severe collateral effects during planned and emergency application of immunotherapies when the allergy source cannot be avoided for treatment. To date, no tests have been developed to accompany the wide range of antivenoms produced from horse sera. The aim of this was to develop a cost-effective ELISA of high sensitivity and specificity to detect circulating patient IgE that binds horse IgG₃, the most prevalent antibody class in passive antibody therapies. Horse IgG₃ was purified in a single step on jacalin-Sepharose and absorbed to standard ELISA plates as the capture molecule for reactive human IgE. The direct performance evaluation with allergenic and non-allergenic patient, together with competitive peptides assays, showed high sensitivity and specificity to detect human IgE that recognized horse IgG₃. The analytical sensitivity and ED₅₀ were calculated to be 0.01 μg mL⁻¹ and 0.052 μg mL⁻¹, respectively. The intra- and inter-assay coefficient of variation ranged from 3.3 to 11.1% and 4.0–8.0%, respectively. The horse IgG₃-based ELISA assay can detect reactive allergenic IgE at picomolar concentrations. The coefficient of variation suggests that it can be easily standardized between laboratories, provide rapid and can be applied to population surveillance. Patient management during treatment for envenomation would be greatly improved by a robust and reliable diagnostic test for preexisting allergies to mitigate life-threating consequences of hypersensitivity.
Palabras clave en portugues
AnafilaxiaHipersensibilidade
Antiveneno
Ensaio de diagnóstico
Ensaio imunológico
Peptídeo antígeno múltiplo
Ensaio de Imunoadsorção Enzimática
Palabras clave en ingles
AnaphylacticAntivenom
Diagnostic assay
ELISA
Hypersensitivity
Immunological assay
Multiple antigen peptide
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