Caracterização da resposta imune celular em cães frente a novos antígenos de Leishmania infantum

Abstract

A resposta imune na Leishmaniose Visceral Canina (LVC) é importante para o controle e a cura da infecção. Dentro desse contexto, proteínas que estimulam um perfil do tipo Th1, tem sidoexplorada como candidatos vacinais. Desta forma, o objetivo deste estudo foiavaliar a resposta imune celular decães frente a novas proteínas recombinantes, para obtenção de subsídios científicos que direcionem estudos de vacinologia. Para isto amostras de sangue de cães com LV residentes em área endêmica em Pernambuco foram coletadas. Um estudo piloto foi realizado para escolha dos estímulos in vitro, bem como concentrações antigênicas e tempo de cultivo. Após separação das células mononucleares do sangue periférico (PBMC), as células foram submetidas ao estímulo com antígenos Lci10, Lci13 e a proteína quimérica Q1 nas concentrações de 2,5µg/mL, 5µg/mL e 10µg/mL, e antígeno bruto solúvel de L. infantum (LSA) nas concentrações de 10µg/mL e 25µg/mL por 24h, 48h e 72h. Ao fim do tempo de cultivo o RNA total foi extraído e uma transcrição reversa para cDNA foi realizada para avaliação da expressão gênica para as citocinas IFN-γ, TNF, IL-2, IL-4, IL-10 e TGF-β através do método de Ct comparativo por RT-PCR em tempo real. Para o LSA a concentração de 25µg/mL foi escolhida, por apresentar uma melhor expressão das citocinas tanto do perfil Th1, quanto Th2. O PBMC que foi estimuladocom a Lci13 (5µg/mL em 24h de cultivo),apresentou um o perfil protetor (Th1) quando comparado com o LSA. Por esta razão, este antígeno foi escolhido para análise nos grupos de estudo. Após, estabelecimento das condições de cultivo, 19 cães foram incluídos em nosso estudo, sendo 7 para o grupo controle, 7 para o grupo sintomático e 5 para o grupo assintomático. Foi observado que apesar de não haver diferenças estatísticas significativas entre os grupos analisados, de forma descritiva o estímulo da Lci13 em animais controle foi bastante promissor, com a expressão positiva para IFN-ɣ e TNF, além da presença da IL-10 atuando como regulador da resposta imune, e uma expressão negativa para TGF-β. Além disso, a correlação entre IFN-ɣ e TNF (p=0,042) e IFN-ɣ e IL-10 (p=0,049) foi significativa e indicou uma forte correlação positiva entre as citocinas. Para os grupos sintomáticos e assintomáticos apenas o TNF foi expresso de forma positiva, havendo uma supressão de TGF-β. A partir dos resultados obtidos, o estudo foi capaz de fornecer subsídios científicos com relação a imunologia na LVC. O antígeno Lci13 em cães controle apresentou um bom desempenho, abrindo espaço para novas pesquisas para desenvolvimento de uma vacina profilática.