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https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/23688
CINÉTICA DE CARGA VIRAL EM COMPONENTES DO SANGUE DE PACIENTES CRONICAMENTE INFECTADOS PELO VÍRUS DA HEPATITE C, ANTES E DURANTE TERAPIA TRIPLA
Fradico, Jordana Rodrigues Barbosa | Date Issued:
2017
Advisor
Co-advisor
Comittee Member
Affilliation
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Rene Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil.
Abstract in Portuguese
A hepatite C é um grave problema de saúde pública mundial, causada pelo vírus da hepatite C (VHC). Apesar dos hepatócitos serem o alvo principal do VHC, o vírus pode ainda interagir com monócitos, linfócitos, células endoteliais, eritrócitos e plaquetas. Neste contexto o presente estudo buscou avaliar a cinética viral em componentes do sangue de pacientes sintomáticos cronicamente infectados pelo VHC, antes e durante a terapia tripla (interferon-peguilado/ribavirina e inibidor de protease). Com esta finalidade, os seguintes objetivos específicos foram propostos para a população avaliada: otimizar uma metodologia in house para adaptação do kit Abbott RealTime HCV ® (Abbott Molecular, EUA) para a execução da quantificação da carga viral de VHC em soro, sangue total, eritrócitos, plaquetas e leucócitos; quantificar a carga viral de VHC nesses componentes sanguíneos; associar e correlacionar a carga viral de VHC com dados laboratoriais dos pacientes antes e durante terapia tripla. Os objetivos foram cumpridos pela execução da metodologia de transcrição reversa seguida de PCR em tempo real ( RT-qPCR) utilizando o kit Abbott RealTime HCV ®. Dessa maneira avaliou-se amostras de componentes sanguíneos de 20 pacientes com diagnóstico confirmado de hepatite C crônica, infectados pelo VHC genótipo 1. Esta população de estudo apresentou perfis epidemiológicos e clínico-laboratoriais semelhantes aos descritos na literatura. Obteve-se otimização do kit Abbott RealTime HCV ® para quantificação do RNA-VHC em condições de pesquisa e aumentou-se em 4 vezes o número de reações por kit, resultando em uma economia financeira considerável. A análise da quantificação da carga viral foi realizada por quatro variáveis, sendo elas: tempo de tratamento, componente sanguíneo, níveis da carga viral e desfecho clínico. Em todas, observou-se que o soro foi o componente com maiores níveis de carga viral e as hemácias com menor nível. Durante a terapia tripla, houve redução dos níveis de cargas virais em todos os componentes sanguíneos analisados. Esta redução só não foi observada na 24ª semana de tratamento, quando houve aumento das cargas virais, quando comparado com a quarta semana. Estes ní veis apresentaram queda na 48ª semana sem, no entanto, atingir carga nula no soro, sangue total, hemácias e plaquetas. Positividade que não foi capaz de alterar o desfecho clínico dos pacientes, que se mantiveram apresentando resposta virológica sustentada (RVS). A concretização deste estudo demonstrou que pacientes infectados pelo VHC cronicamente apresentaram altas cargas de VHC associa das aos componentes sanguíneos. O tratamento medicamentoso da infecção a presentou-se eficiente e efetivo, provocando uma alteração na cinética de interação do vírus com os componentes sanguíneos. O aumento das cargas virais n a 24ª semana é um indicativo de que esta é uma semana crítica na terapia tripla, que merece maior atenção dos profissionais de saúde. A constatação de baixas cargas virais no soro, sangue total, hemácias e plaquetas na 48ª semana da terapia foi um resultado surpreendente do estudo, visto que 85,7% dos pacientes obtiveram RVS. Sugere-se a continuidade de estudos que aprofundem pontos importantes evidenciados por este trabalho. Os resultados obtidos proporcionaram um entendimento maior da fisiopatologia do processo e da interação do VHC com os componentes do sangue.
Abstract
Hepatitis C is a serious global public health proble m, caused by the hepatitis C virus (HCV). Although hepatocytes are the major target of HCV, the virus may still interact with monocytes, lymphocytes, endothelial cells, eryt hrocytes, and platelets. In this context, the present study sought to evaluate viral kinetics in blood components of patients chronically infected with HCV before and dur ing triple therapy (pegylated interferon/ ribavirin and protease inhibitor). The following specific objectives were proposed: to optimize an in-house methodology for th e adaptation of the Abbott RealTime HCV ® kit (Abbott Molecular, USA) for the quantification of HCV viral load in serum, whole blood, erythrocytes, platelets and leuk ocytes; to quantify the HCV load in these blood components; to associate and correla te HCV load with laboratorial data of patients before and during triple therapy. T he objectives were met by the implementation of the reverse transcription methodo logy followed by real-time PCR (RT-qPCR) using the Abbott RealTime HCV ® kit. Using this approach, peripheral blood samples from 20 patients with a confirmed diagn osis of chronic hepatitis C, infected by HCV genotype 1, were analyzed. This study population presented epidemiological and clinical-laboratorial profiles s imilar to those described in the literature. Abbott RealTime HCV ® kit was optimized for HCV RNA quantification in research conditions and increased the number of rea ctions per kit in 4 times. The analysis of the viral load was performed by four var iables: treatment time, blood component, viral load levels and clinical outcome. In all of them, it was observed that serum was the component with the highest levels of vir al load and the red cells with the lowest level. During triple therapy, there was a r eduction in levels of viral loads in all blood components analyzed. This reduction was no t observed at 24th week of treatment, when viral loads increased when compared t o the fourth week. At 48th week, the viral load levels were decreased without, ho wever, reaching zero load in serum, whole blood, red blood cells and platelets. T his persistent positivity was not able to change the clinical outcome of the patients, who maintained a sustained virological response (SVR). The achievement of this st udy demonstrated that HCV chronically infected patients present high HCV loads associated with blood components. The drug treatment of the infection was e fficient and effective, causing a change in the kinetics of virus interaction in the blood components. The increase in viral load at 24th week is indicative that this is a critical week in triple therapy, which deserves more attention from health professionals. Low viral load in serum, whole blood, red blood cells and platelets at 48th week o f therapy was a surprising result of the study, since 85.7% of the patients obtained SVR. This finding suggests that additional studies could im prove the understanding of the mechanisms responsible for the blood components-HCV interaction during the viral infection.
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