Integração de diferentes abordagens para a avaliação de atividade antiparasitária, propriedades ADMET e alvos celulares de novas Arilimidamidas sobre Trypanosoma cruzi

Abstract

A fim de contribuir para identificação de novas alternativas para o tratamento da silenciosa e progressiva doença de Chagas (DC), na presente dissertação a atividade in silico, in vitro e in vivo de cinco novas arilimidamidas (AIAs) foi realizada. Filtros computacionais de falso-positivos classificaram as AIAS 2EVK008, 27SMB078, 28SMB032, 31DAP069, 36DAP015 como compostos não formadores de PAINS, além de um painel farmacocinético favorável. As triagens com células in vitro mostraram que a maioria dos compostos exibiu atividade promissora contra formas tripomastigotas sanguíneas (cepa Y \2013 DTU II) e sobre formas intracelulares (cepa tulahuen \2013 DTU VI), com EC50 variando entre 0,3-10,5 \03BCM e 0,5-7,8 \03BCM respectivamente. A terapia combinada de benznidazol (Bz) e 28SMB032, usando uma metodologia de proporções fixas, foi indicativa de ausência de interação. A atividade tripanocida foi posteriormente validada usando culturas de células cardíacas como células hospedeiras e formas intracelulares da cepa Y e verificou-se que 28SMB032 apresentou efeito semelhante ao Bz (cerca de 1.5 \03BCM) além de alta seletividade (IS = 191), encorajando-nos a dar continuidade com este composto nos ensaios in vivo. Infelizmente o 28SMB032 foi muito tóxico para os modelos murinos de infecção aguda por T. cruzi, provocando > 83% de mortalidade em curto período pós-tratamento, provavelmente devido à insuficiência renal aguda. No estudo em questão, a predição computacional de alvos in silico usando target fishing e abordagens ultraestruturais foram combinadas para explorar os componentes celulares de formas tripomastigotas sanguíneas de T. cruzi tratados por AIAs previamente selecionadas nos estudos in vitro. A análise ultraestrutural demonstrou que, embora a análise computacional tenha predito o DNA como alvo principal das AIAs estudadas, não foram observadas alterações significativas no material genético do núcleo e mitocôndria (kDNA) do parasito tratado. Os danos celulares mais frequentes detectados pela microscopia eletrônica de transmissão foram distorção de Golgi, distensão da membrana plasmática e do envelope nuclear além da presença de grande número de membranas concêntricas e figuras de mielina, de perfis de retículo endoplasmático envolvendo componentes citoplasmáticos sugestivos de morte celular por autofagia. Esta tradução ineficaz entre os resultados in vitro, in silico e in vivo reforça a importância de se explorar diferentes abordagens durante os estudos pré-clínicos, a fim de contribuir para a descoberta de fármacos para o tratamento da DC.