Análise da resposta imune nos modelos murinos de infecção oral pelo Trypanosoma cruzi e Listeria monocytogenes

Abstract

Frequentemente, os estudos de infecção oral consideram a inoculação de patógenos pelas vias intragástrica (IG) e na cavidade oral (IO) como similares, no entanto a inoculação IO assemelha-se mais com a transmissão na natureza. Atualmente no Brasil, a transmissão oral da doença de Chagas, causada pelo Trypanosoma cruzi, consiste em 70-80% dos casos, representando um problema de saúde pública. Dados prévios demonstraram que a infecção IO apresenta um perfil distinto da IG, promovendo maior infectividade, parasitemia e mortalidade. Paralelamente, a listeriose, causada pela Listeria monocytogenes, é transmitida oralmente e está entre as doenças por ingestão de alimentos que mais causam mortes. Vale ressaltar que ainda há uma carência de estudos relacionados à fisiopatologia e a resposta imune após infecção pela via oral em modelos experimentais. Neste trabalho, foram abordados dois modelos de infecção oral: pelo T. cruzi e por L. monocytogenes. Camundongos infectados e tratados com hidróxido de magnésio apresentaram resultados similares aos não tratados, sugerindo que as diferenças observadas previamente entre IG e IO não estavam associadas a um efeito deletério do pH gástrico. A análise histopatológica do fígado demonstrou que IO apresentou infiltrado inflamatório mais extenso e maiores níveis atividade sérica ase enzimas hepáticas ALT e AST que IG. Tanto no fígado como no coração foram observadas morte celular pela marcação de TUNEL e presença de colágeno pela coloração de Picro Sirius A Análise de RT-PCR do tecido cardíaco confirmou a maior expressão gênica de TNF-\03B1, IFN-\03B3, assim como IL-10 no tecido do grupo IO comparado ao IG. Imunomarcações revelaram que os macrófagos são a principal fonte tecidual de TNF-\03B1, sendo a mortalidade do grupo IO associada aos elevados níveis séricos de TNF-\03B1, uma vez que o seu bloqueio aumentou a sobrevivência dos animais infectados oralmente pelo T. cruzi. Em relação à infecção com L. monocytogenes, em até 20h após a infecção oral, os dados sugerem uma detecção preferencial de CFU da bactéria expressando OVA nos linfonodos mandibulares (mandLNs). Além disso, as análises por citometria de fluxo foram sugestivas de que os estágios iniciais da ativação de células OVA-específicas ocorrem nesse tecido. Também foi estabelecida a cirurgia para exposição dos mandLNs e visualização intravital da migração de células específicas por microscopia de dois fótons. Nossos dados demonstraram que a passagem do patógeno pela a cavidade oral inflencia a parasitemia, mortalidade, comprometimento de órgãos alvo e perfil de citocinas, e os elevados níveis de TNF-\03B1 observados após a infecção oral estão associados à alta mortalidade. Além disso, os dados sugerem que há um direcionamento inicial do patógeno para os mandLNs, onde ocorre preferencialmente a ativação da resposta de células T CD8 antígeno-específicas