Use este identificador para citar ou linkar para este item:
https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/19540
Tipo de documento
DissertaçãoDireito Autoral
Acesso aberto
Coleções
Metadata
Mostrar registro completo
CARACTERIZAÇÃO FENOTÍPICA E GENOTÍPICA DE CEPAS DE YERSINIA ENTEROCOLITICA ISOLADAS DE DIFERENTES ORIGENS NO BRASIL
Genes
Virulência
Testes de Sensibilidade Microbiana
Reação em Cadeia da Polimerase
Rusak, Leonardo Alves | Data do documento:
2013
Autor(es)
Membros da banca
Afiliação
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil
Resumo
Desde a sua inclusão na família Enterobacteriaceae, em 1972, Yersinia enterocolitica vem sendo extensivamente estudada, por se tratar de um patógeno de natureza zoonótica com relevância em saúde pública, amplamente distribuído na natureza em reservatórios aquáticos e fontes animais. Tendo o suíno como principal reservatório, por ser portador de cepas dos mesmos biosorotipos encontrados em humanos, Y. enterocolitica possui diversos genes de patogenicidade, tanto cromossomiais (inv, ail e ystA) como plasmidiais (virF), que lhes confere a capacidade de invadir e sobreviver em um organismo hospedeiro. Esse estudo teve como objetivo analisar cepas de Y. enterocolitica oriundas de fontes animal, alimentar, ambiental e humana de diferentes regiões do Brasil, para a detecção dos genes de virulência supracitados através da técnica da PCR em conjunto com testes fenotípicos, além da análise da susceptibilidade aos antimicrobianos através do método de disco-difusão para que, junto com os resultados da PCR, pudesse ser avaliado seu potencial patogênico. Para a avaliação da diversidade filogenética das cepas foram empregadas as técnicas de ERIC-PCR e do PFGE. Em um total de 60 amostras, foram encontradas 11(18%) amostras pertencentes ao sorotipo O:3, biotipo 4 de origens humana e animal possuidoras de todos os genes de virulência. Dez amostras humanas (O:3/B4) apresentaram somente os 3 genes cromossomiais, e 9 amostras pertencentes ao biotipo 1A apresentaram o gene inv. No que tange à resistência aos antimicrobianos, 60 (100%) amostras foram resistentes à ampicilina, 58(97%) à cefalotina, 6(10%) ao sulfametoxazol-trimetoprim, 7(12%) à tetraciclina e 1(2%) à amicacina
O perfil de resistência predominante foi AMP-KF-RL. Cinco amostras apresentaram resistência a cinco antibióticos, sendo a amostra YE42 resistente a 3 classes de antibióticos diferentes. O ERIC-PCR revelou a existência de 32 ERIC genótipos (EGT), gerando um índice discriminatório de diversidade de 0,924. Quarenta amostras pertencentes ao sorovar O:3 biotipo 4 de origens humana, animal, alimentar e ambiental ficaram agrupadas dentro de 12 EGTs em um conjunto com uma similaridade de 85%. Já as amostras do Biotipo 1A isoladas de alimentos e ambiente são extremamente heterogênicas sorologicamente, e apresentaram padrões de banda mais diversificados. A análise do PFGE nos revelou a existência de nove clusters (A até I) agrupando os isolados com similaridade \2265 85%. Nestes clusters, foram agrupados trinta e seis padrões únicos de banda (PPT), gerando um índice discriminatório de diversidade de 0,957. O cluster A englobou todas as amostras do sorovar O:3 biotipo 4 isoladas de animal e de casos humanos. Com base nos resultados, conclui-se que cepas com os mesmos perfis genotípicos, isolados de humanos e animais, do sorovar O:3 e biotipo 4, encontram-se circulantes por vários estados do Brasil. Além disso, com base no exposto, sugere-se que o suíno possa funcionar como principal elemento na cadeia de transmissão de Y. enterocolitica para o homem, por albergar cepas dos mesmos genótipos encontrados em infecções humanas
Resumo em Inglês
Yersinia enterocolitica
is been extensively studied since it has joined the
family
Enterobacteriaceae
in 1972, for it is a pathogen of zoonotic origin, highly relevant for
public health, widely spread in nature through
out water and animal reservoirs. The swine is
the main reservoir, being a host of strains of the same bioserotypes found in humans.
Y.
enterocolitica
has
several pathogenicity genes
, both chromosomal
(
inv, ail
and
ystA)
, and
plasmidal (
virF
), thus being ab
le to invade and survive inside a host organism. This study
aims at analyzing strains of
Y. enterocolitica
from animal, food, environmental and human
origin from several regions of Brazil, in order to trace the virulence genes above
mentioned
via PCR techn
ique jointly with phenotypic tests, in addition to the analysis of antimicrobial
susceptibility through disk
-
diffusion method, so together with the PCR results, we may
evaluate its pathogenic potential. For the purpose of evaluating the phylogenetic divers
ity of
strains there were used the ERIC
-
PCR and PFGE tech
niques. In a total of 60 strains
,
there
were found 11 (18%) strain
s from serotypes O:3, biotype 4 of human and animal origin with
all v
irulence genes. Ten human strain
s (O:3/B4) only show the 3
chrom
osomal genes, and 9
strain
s from Biotype 1A show gene
inv
. Regarding the resistance to
antimicrobials, 60
(100%) strain
s were resistant to ampicillin, 58 (97%) to cefalotin, 6 (10%) to
sulphametoxazole
-
thrimetroprim, 7 (12%) to tetracycline and 1 (2%) to a
mikacin. Five
strains
are found resistant to five
antibiotics. ERIC
-
PCR found 32 ERIC genomic types (EGT), thus
generating a discrimination index of
diversity of 0.924. Forty strains from serotype
O:3,
biotype 4 of human, animal, food and environmental ori
gins were grouped within 12 EGTs in
a set with 85% of similarity. On t
he other hand, Biotype 1A strain
s isolated from food and
environment are extremely heterogenic in terms of serology and have more diversified band
profiles. The PFGE analysis has found n
ine clusters (from A to I), t
hus grouping the isolated
strain
s with similarity
≥ 85%. Thirty
-
six single band profiles (PPT) were grouped from these
clusters, thus generating a discrimination index of diversity of 0.957. Cluster A
covered all
strains from serotype
O:3, biotype 4, isolated from animal and human cases. Based on the
resu
lts, it is concluded that strains with the same genotype profiles, isolated from
humans
and animals, from serotype
O:3 and biotype 4, are circulating throughout various Brazilian
states. Also, the swine
may
act
as the main element in the chain of transmiss
ion of
Y.
enterocolitica
to humans, for it has strains from the same genotypes found in human
infections
DeCS
Yersinia enterocoliticaGenes
Virulência
Testes de Sensibilidade Microbiana
Reação em Cadeia da Polimerase
Compartilhar