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- IOC - Artigos de Periódicos [12596]
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AN IMPROVED METHOD FOR P2X7R ANTAGONIST SCREENING
Spectrofluorometry
P2X7R Antagonist Screening
P2X ionotropic receptor family
Structure-Activity Relationship
Author
Affilliation
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório de Comunicação Celular. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório de Comunicação Celular. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório de Comunicação Celular. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Universidade Federal do Rio de Janeiro. Laboratório de Pesquisa Integrada. Campus Macaé Professor Aloísio Teixeira. Macaé, RJ, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório de Comunicação Celular. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunofarmacologia. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunofarmacologia. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório de Comunicação Celular. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório de Comunicação Celular. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório de Comunicação Celular. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Universidade Federal do Rio de Janeiro. Laboratório de Pesquisa Integrada. Campus Macaé Professor Aloísio Teixeira. Macaé, RJ, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório de Comunicação Celular. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunofarmacologia. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório de Imunofarmacologia. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório de Comunicação Celular. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Abstract
ATP physiologically activates the P2X7 receptor (P2X7R), a member of the P2X ionotropic
receptor family. When activated by high concentrations of ATP (i.e., at inflammation sites),
this receptor is capable of forming a pore that allows molecules of up to 900 Da to pass
through. This receptor is upregulated in several diseases, particularly leukemia, rheumatoid
arthritis and Alzheimer's disease. A selective antagonist of this receptor could be useful in
the treatment of P2X7R activation-related diseases. In the present study, we have evaluated
several parameters using in vitro protocols to validate a high-throughput screening
(HTS) method to identify P2X7R antagonists. We generated dose-response curves to determine
the EC50 value of the known agonist ATP and the ICs50 values for the known antagonists
Brilliant Blue G (BBG) and oxidized ATP (OATP). The values obtained were
consistent with those found in the literature (0.7 ± 0.07 mM, 1.3-2.6 mM and 173-285 μM for
ATP, BBG and OATP, respectively). The Z-factor, an important statistical tool that can be
used to validate the robustness and suitability of an HTS assay, was 0.635 for PI uptake
and 0.867 for LY uptake. No inter-operator variation was observed, and the results obtained
using our improved method were reproducible. Our data indicate that our assay is suitable
for the selective and reliable evaluation of P2X7 activity in multiwell plates using spectrophotometry-based
methodology. This method might improve the high-throughput screening
of conventional chemical or natural product libraries for possible candidate P2X7R antagonist
or agonist.
Keywords
P2X7 activitySpectrofluorometry
P2X7R Antagonist Screening
P2X ionotropic receptor family
Structure-Activity Relationship
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