Avaliação do efeito do derivado de β-lapachona R72 em formas tripomastigotas de Trypanosoma cruzi e na infecção de macrófagos pelo T. cruzi in vitro

Abstract

A tripanossomíase americana também conhecida como doença de Chagas é um importante problema de saúde pública, uma doença de origem parasitária que afeta 8 milhões de pessoas na América Latina (OMS, 2013). Atualmente existem apenas dois fármacos utilizados na prática clínica: o benzonidazol e o nifurtimox. Esse último não é usado no Brasil. Esses fármacos apresentam efeitos colaterais e são confrontados com cepas resistentes (FILARDI e BRENER, 1987; MEJIA et al., 2012). Desta forma, torna-se necessária a busca de compostos que apresentem maior eficácia e menor toxicidade. No presente trabalho foi avaliado o efeito do composto derivado de β–lapachona, R72, em formas tripomastigotas de T. cruzi e em macrófagos infectados in vitro. Observamos que a R72 reduziu, significativamente (p<0,05), o número de parasitos viáveis, produzindo IC50 de 15 μM. A análise ultraestrutural revelou que a R72 causou danos na bolsa flagelar, cinetoplasto e mitocôndrias. Além disso, encontramos a presença de corpúsculos lipídicos e figuras de mielina no citoplasma do protozoário, indicando processos de autofagia, a qual foi confirmada pela sonda MDC. A análise por citometria de fluxo indicou morte por apoptose, necrose e produção de espécies reativas de oxigênio. Além disso, o composto não apresentou toxicidade para células de mamíferos em concentrações inferiores a 200 μM. A R72 reduziu, significativamente, a percentagem de macrófagos infectados pelo T. cruzi e o número de parasitos por macrófagos. Verificamos inibição da internalização de parasitos quando os macrófagos foram tratados previamente com o composto R72. Análise ultra-estrutural evidenciou um processo de autofagia caracterizado pela presença de vacúolo autofágico e formação de corpúsculos lipídicos. O mecanismo envolvido na formação de vacúolos autofágicos e corpúsculos lipídicos é independente da produção de óxido nítrico. Esses resultados ajudam a elucidar os mecanismos de ação de fármacos potenciais para a quimioterapia da doença de Chagas.