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CELL DISRUPTION USING A DIFFERENT METHODOLOGY FOR PROTEOMICS ANALYSIS OF TRYPANOSOMA CRUZI STRAINS
Proteômica
Espectrometria de Massas
Citometria de Fluxo
Water bath sonication
Mass spectrometry
Trypanosoma cruzi
Flow cytometry
Proteomics
Autor
Afiliación
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório Interdisciplinar de Pesquisas Médicas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório de Biologia Molecular. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório de Biologia Molecular e Doenças Endêmicas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório Interdisciplinar de Pesquisas Médicas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Instituto Conmemorativo Gorgas de Estudios de la Salud (ICGES). Laboratório de Parasitologia. Panamá, Panamá.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório Interdisciplinar de Pesquisas Médicas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório Interdisciplinar de Pesquisas Médicas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório de Biologia Molecular. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório de Biologia Molecular e Doenças Endêmicas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório Interdisciplinar de Pesquisas Médicas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Instituto Conmemorativo Gorgas de Estudios de la Salud (ICGES). Laboratório de Parasitologia. Panamá, Panamá.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório Interdisciplinar de Pesquisas Médicas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Laboratório Interdisciplinar de Pesquisas Médicas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Resumen en ingles
We have developed a cell disruption method to produce a protein extract using Trypanosoma cruzi cells
based on a straightforward hypoosmotic lysis protocol. The procedure consists of three steps: incubation
of the cells in a hypoosmotic lysis buffer, sonication in a water bath, and centrifugation. The final protein
extract was designated TcS12. The stages of cell disruption at different incubation times were monitored
by differential interference contrast microscopy. After 30 min of incubation in lysis buffer at 4 C, the T.
cruzi epimastigote forms changed from slender to round-shaped parasites. Nevertheless, cell disruption
took place following sonication of the sample for 30 min. The efficiency of the methodology was also validated
by flow cytometry, which resulted in 72% of propidium iodide (PI)-labeled cells. To estimate the
protein extraction yield and the differential protein expression, the proteomics profile of four T. cruzi
strains (CL-Brener, Dm28c, Y, and 4167) were analyzed by liquid chromatography tandem mass spectrometry
(LCMS/MS) on a SYNAPT HDMS system using the label-free MSE approach. ProteinLynx Global
Server (version 2.5) with ExpressionE analysis identified a total of 1153 proteins and revealed 428 differentially
expressed proteins among the strains. Gene ontology analysis showed that not only cytosolic
proteins but also nuclear and organellar ones were present in the extract.
Palabras clave en portugues
Trypanosoma cruziProteômica
Espectrometria de Massas
Citometria de Fluxo
Palabras clave en ingles
Hypotonic lysis bufferWater bath sonication
Mass spectrometry
Trypanosoma cruzi
Flow cytometry
Proteomics
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