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https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/6969
ANÁLISE DO ESPAÇADOR INTERGÊNICO DO GENE DE CALMODULINA EM PARASITAS DA FAMÍLIA TRYPANOSOMATIDAE TRYPANOSOMATIDAE: POTENCIAL COMO MARCADOR MOLECULAR
Taxonomia dos tripanossomatídeos
Materiais e Métodos
Características Gerais
Acosta, Franklyn Enrique Samudio | Date Issued:
2010
Advisor
Comittee Member
Affilliation
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Abstract in Portuguese
A caracterização e descrição de espécie na família Trypanosomatidae aindaa depende da
morfologia e identidade de ho ospedeiros dos tripanossomatídeos. Embora várioos marcadores
moleculares tenham sido descriitos nas ultimas décadas nenhum deles tem sido proposto como
uma ferramenta molecular defin nitiva para complementar a informação ministrada pelas análises
morfológicas. Com objetivo dee avaliar o potencial do espaçador intergênico o do gene de
calmodulina como marcador molecular e estudar a composição desta a região nos
tripanossomatídeos, foram ampl lificados clonados e seqüenciados os espaçadores intergênicos de
Crithidia
fasciculata,
C.
deane
ei, C.
guilhermei, C.
acanthocephali, C.
luciliae
, C.
desouzai,
Trypanosoma
rangeli
e compara ados com as sequências que estão publicamente diisponíveis de T.
brucei, T.
cruzi, Leishmania
mex
xicana, L.
major, L.
infantum, L.
tarentolae
e Phytom
monas
serpens.
Características como organizaçã ão genética do gene de calmodulina, conteúdo de G G+C e presença
de repetições de simples sequêência também foram avaliados. O gene de calmo odulina mostrou
estar organizado in
tandem
de dduas a quatro copias separados por espaçadores intergênicos os
quais podem apresentar variaç ção no tamanho. Estes espaçadores mostraram ppouca variação
intraespecífica no seu conteúd do de G+C sem importar qualquer diferença de tamanho. Nos
tripanossomatídeos monoxênico os a tendência aponta que os organismos com um espaçador
intergênico maior apresentam um m conteúdo maior de G+C. Evidenciou-se a presenç ça de repetições
de sequência simples nos espaaçadores, elementos vinculados com a regulação o da expressão
genética dos tripanossomatídeoss. Embora o espaçador de calmodulina mostre var riabilidade entre
as copias do gene, nós demonst tramos que sequências na região 5'UTR localizadas s imediatamente
antes do codon de inicio são esppécie-específicas. Uma vez que este segmento gen nético é de fácil
amplificação e esta limitado po or uma sequência conservada (ORF), resulta factív vel desenvolver
uma ferramenta molecular que auxilie a morfologia tradicional na identificação d de espécies na
família Trypanosomatidae.
Abstract
pecies description and charac cterization in the family Trypanosomatidae is still d dependent upon
morphology and host range. AAlthough several molecular markers have been de escribed in last
decades none of them have bbeen proposed as bona
fide
tool for complementiing the specific
information provided by morpholoogical analysis. To assess the potential of the calmo odulin spacer as
a molecular marker and study the composition of this genetic segment in trypa anosomatids we
amplified, cloned and sequenceed calmodulin spacers from Crithidia
fasciculata, C.
deanei, C.
guilhermei, C.
acantochephali, CC.
luciliae, C.
desouzai, T.
rangeli
and compared the em with publicly
available sequences from T.
bbrucei, T.
cruzi, Leishmania
mexicana, L.
major, L.
infantum, L.
tarentolae
and Phytomonas
serp
pens. Characteristics such as gene organization, G +C content and
presence of simple sequence reepeats were also appraised. The calmodulin gene e showed to be
array in tandem of two to four c copies separated by intergenic spacers that could b be or not of the
same length. Regardless the sp pacer size, these genetic segments presented a litttle intraspecific
variation in G+C content. We deemonstrated that the G+C content in monogenic trrypanosomatids
tends to be higher in trypanosom matids with a longer spacer. Simple sequence repe eats were found
in all trypanosomatids spacers s, elements that are strongly related to the regu ulation of gene
expression in these parasites. Thhough calmodulin spacer exhibits inter-copy sequen nce variation we
demonstrated that 5' sequences immediately upstream of the initiaton codon are spe ecies specific to
tag species. This finding enables s the identification of particular species in Trypanoso omatidae family.
As this genetic segment is easy to amplify and it is flanked by an evolutionary conse erved sequence
(ORF) it would be feasible to d develop a molecular tool that aid traditional morpho ology to identify
trypanosomatids species.
Keywords in Portuguese
TripanossomatídeosTaxonomia dos tripanossomatídeos
Materiais e Métodos
Características Gerais
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