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https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/64009
ESTABELECIMENTO DE LOTE DE REFERÊNCIA DE TRABALHO PARA O ENSAIO DE POTÊNCIA DA VACINA ADSORVIDA CONTRA HEPATITE B
Faro, Karen Vasconcelos de Farias | Date Issued:
2024
Affilliation
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Abstract in Portuguese
O desenvolvimento de vacinas contra Hepatite B tem sido essencial para prevenção desta doença viral que, de acordo com a OMS, em 2019 matou cerca de 820 mil indivíduos, e estima-se que, a cada ano, em torno de 1,5 milhões de novas infecções surgem em todo o mundo. No Brasil, estas vacinas são distribuídas gratuitamente pelo Programa Nacional de Imunizações (PNI). Nesse contexto, o Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde – INCQS, presente na Fundação Oswaldo Cruz (FIOCRUZ), é essencial, pois é a instituição responsável por realizar o controle da qualidade de todas as vacinas do PNI. As vacinas contra Hepatite B disponibilizadas pelo PNI possuem a tecnologia de DNA recombinante para expressão do antígeno de superfície do vírus da Hepatite B (HBsAg) em leveduras. Um dos ensaios realizados no INCQS, é a determinação da potência que avalia a capacidade da vacina em oferecer imunidade após sua administração. O método utilizado nesta avaliação é um ensaio imunoenzimático (ELISA), que quantifica o HBsAg presente na amostra. Um dos instrumentos críticos para o cumprimento das diretrizes de qualidade contidos na Resolução Diretoria Colegiada (RDC) 512/2021 estabelecida pela Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA), que dispõe sobre as Boas Práticas para Laboratórios de Controle de Qualidade, na norma ABNT NBR ISO/IEC 17025:2017 e na Farmacopeia Brasileira é o uso de controles internos durante a execução dos ensaios laboratoriais de controle, de modo a garantir a qualidade e a validade dos resultados obtidos. Neste cenário, o presente trabalho objetiva estabelecer um lote de referência de trabalho interno para o produtor LG CHEM/ Instituto Butantan, a ser utilizado nos ensaios de avaliação de potência de vacina deste mesmo produtor. Para isto, com base na análise documental dos resultados apresentados no Protocolo Resumido de Produção e Controle de Qualidade do Produto (PRPCQ), um lote de vacina candidata à referência de trabalho foi selecionado, e foram realizados quatro ensaios de potência, com dois analistas diferentes, em dias distintos. Os resultados foram avaliados estatisticamente por meio de análises de “Linhas Paralelas”, que verificou desvios de linearidade e paralelismo, através do Software Combistats® v.7. Posteriormente, um gráfico de controle foi elaborado a partir dos valores de absorbância, utilizando o Software SPC Explorer RT ® v.5, estabelecendo limites máximo e mínimo aceitos. Por fim, no Software Combistats® v.7, a potência da vacina referência de trabalho foi calculada através da combinação dos resultados de potência. Todos os ensaios foram considerados satisfatórios, não exibindo desvios de linearidade e paralelismo. Além disso, as potências estimadas foram superiores a 75% do valor rotulado pelo produtor. As absorbâncias de cada diluição se mantiveram dentro dos limites estabelecidos pelo gráfico de controle. Pode-se inferir, portanto, que o lote candidato à vacina de Referência de Trabalho atendeu às condições necessárias para se tornar o novo lote de vacina de Referência de Trabalho.
Abstract
The development of vaccines against Hepatitis B has been essential for the prevention of this viral disease which, according to the WHO, killed around 820,000 people in 2019, and it is estimated that around 1.5 million new infections occur worldwide each year. In Brazil, these vaccines are distributed free of charge by the National Immunization Program (PNI). In this context, the National Institute for Quality Control in Health - INCQS, which is part of the Oswaldo Cruz Foundation (FIOCRUZ), is essential, as it is the institution responsible for carrying out quality control of all the PNI vaccines. The Hepatitis B vaccines made available by the PNI use recombinant DNA technology to express the surface antigen of the Hepatitis B virus (HBsAg) in yeast. One of the tests carried out at INCQS is the determination of potency, which aims to assess the vaccine's ability to provide immunity after administration. The method used in this evaluation is an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), which quantifies the HBsAg present in the sample. One of the critical instruments for compliance with the quality guidelines contained in Collegiate Board Resolution (RDC) 512/2021 established by the National Health Surveillance Agency (ANVISA), which provides for Good Practices for Quality Control Laboratories, in the ABNT NBR ISO/IEC 17025:2017 standard and in the Brazilian Pharmacopoeia is the use of internal controls during the execution of laboratory control tests, in order to guarantee the quality and validity of the results obtained. Against this backdrop, this study aims to establish an internal working reference batch for the producer LG CHEM/ Instituto Butantan, to be used in the vaccine potency evaluation tests of this same producer. To this end, based on a documentary analysis of the results presented in the Product Production and Quality Control Summary Protocol (PRPCQ), a batch of vaccine was selected as a candidate for the working reference, and four potency tests were carried out, with two different analysts, on different days. The results were statistically evaluated using "Parallel Lines" analysis, which checked for deviations from linearity and parallelism, using the Combistats® v.7 software. Subsequently, a control graph was drawn up from the absorbance values, using the SPC Explorer RT ® v.5 software, establishing maximum and minimum accepted limits. Finally, in Combistats® v.7, the potency of the reference vaccine was calculated by combining the potency results. All the tests were considered satisfactory, with no deviations in linearity or parallelism. In addition, the estimated potencies were higher than 75% of the value labeled by the manufacturer. The absorbances of each dilution remained within the limits established by the control chart. It can therefore be inferred that the candidate batch for the Working Reference vaccine met the necessary conditions to become the new batch of Working Reference vaccine.
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