Advisor | Polycarpo, Carla Ribeiro | |
Author | Bruno, Roberta Eitler | |
Access date | 2023-12-18T14:14:55Z | |
Available date | 2023-12-18T14:14:55Z | |
Document date | 2012 | |
Citation | BRUNO, Roberta Eitler. RNA ligase (trl1) -like de Trypanosoma brucei: efeitos do RNAi in vitro. 2012. 110 f. Dissertação (Mestrado) – Universidade Federal do Rio de Janeiro, Instituto de Bioquímica Médica, 2012. | en_US |
URI | https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/61843 | |
Abstract in Portuguese | Doenças neligenciadas são definidas como um grupo de doenças infecciosas crônicas relacionadas com a pobreza que ocorrem principalmente em populações da América Latina, África e Ásia. Entre elas estão a Doença de Chagas, Doença do Sono e Leishmaniose, transmitidas por insetos e causadas pelos protozoários Trypanosoma cruzi, Trypanosoma brucei e Leishmania sp., respectivamente. Em busca de conhecimento básico sobre a biologia do tRNA destes tripanossomatídeos e prevendo a possibilidade de descoberta de novos alvos terapêuticos foi estudado o pouco conhecido mecanismo de editoração de tRNAs em tripanossomatídeos. Dentre as enzimas envolvidas na maturação de tRNAs, estão as tRNA ligases, que efetuam a ligação dos éxons gerados após retirada do íntron pela ação de uma tRNA endonuclease. O produto do gene da putativa tRNA ligase dos tripanossomatídeos (trl1-like) não possui homologia com o gene da tRNA ligase humana, sendo um promissor alvo para droga. O gene trl1 (tRNA ligase) é essencial para a levedura S. cerevisiae, dessa forma, esse trabalho procurou caracterizar funcionalmente a tRNA ligase de tripanossomatídeos, analisando os domínios da enzima dos parasitos, investigando a essencialidade do gene trl1-like em T. brucei e observando a atividade da enzima de T. brucei in vitro. O alinhamento das sequências da tRNA ligase de classe I de tripanossomatídeos e leveduras confirmou que as sequências tratam-se de tRNA ligases, apresentando os três domínios: ligase, polinucleotídeo quinase e fosfodiesterase cíclica assim como os motivos conservados essenciais para o funcionamento da enzima. Para os ensaios in vivo, foi construído o plasmídeo pLew100-trl1-2 e transfectado em T. brucei procíclicos, para os ensaios de RNAi. Durante a indução do RNAi pode-se observar a inibição do crescimento do T. brucei, sempre a partir do quarto dia de indução. No entanto, nenhuma alteração no ciclo celular e na viabilidade dos parasitos foi verificada. O silenciamento gênico foi confirmado por qPCR, demonstrando diminuição da expressão do mRNA a partir de 48 h de indução. A enzima Trl1-like foi expressa e purificada in vitro sob diversas condições experimentais, no entanto não foi possível testar sua atividade devido a sua instabilidade in vitro. Esse trabalho permitiu demonstrar a importância da Trl1-like para a sobrevivência do T. brucei contribuindo para um maior entendimento da biologia dos tripanossomatídeos. | en_US |
Language | por | en_US |
Rights | open access | en_US |
Subject in Portuguese | Trypanosoma brucei | en_US |
Subject in Portuguese | tRNA ligase | en_US |
Subject in Portuguese | Editoração de tRNA | en_US |
Title | tRNA ligase (Trl1) -like de Trypanosoma brucei: efeitos do RNAi in vivo | en_US |
Type | Dissertation | en_US |
Defense date | 2012 | |
Defense Institution | Universidade Federal do Rio de Janeiro. Instituto de Bioquímica Médica. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. | en_US |
Degree level | Mestrado Acadêmico | en_US |
Place of Defense | Rio de Janeiro, RJ. | en_US |
Program | Programa de Pós-Graduação em Química Biológica | en_US |
Affilliation | Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. | en_US |
Member of the board | Fernandes, José Roberto Meyer | |
Member of the board | Santos, André Luis Souza dos | |
Member of the board | Levy, Claudia Mansini d’Avila | |
Member of the board | Fantappié, Marcelo Rosado | |
Member of the board | Rodrigues, Juliany Cola Fernandes | |