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https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/60482
VIGILÂNCIA EPIDEMIOLÓGICA DE BACTÉRIAS CAUSADORAS DE IST A PARTIR DE MATERIAL CLÍNICO POR QPCR-HRM
Geraldeli, Kamila Alexandra da Cunha | Date Issued:
2023
Affilliation
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Abstract in Portuguese
A pesquisa se trata de dois microrganismos, ambos associados a IST. A N. gonorrhoeae é uma bactéria em forma de cocos, Gram negativa e considerada fastidiosa, isto é, de difícil cultivo. Outro patógeno ainda pouco conhecido, a bactéria Sneathia amnii, classificada no ano de 2002, se trata de uma bactéria Gram-negativo, fastidiosa e com necessidades nutricionais exigentes, cresce em ágar sangue em aproximadamente 3 dias de incubação. Esta pesquisa tem como objetivo do desenvolvimento de um método de diagnóstico dos agentes etiológicos de IST de baixo custo a partir do material clínico para Neisseria gonorrhoeae. Quanto a Sneathia amnii, será realizado uma investigação para detecção da bactéria a partir de material clínico de IST, utilizando PCR do gene ribossomal 16S e posteriormente o sequenciamento. As cepas isoladas de Neisseria gonorrhoeae foram submetidas à extração e purificação do DNA genômico utilizando o kit PureLink Genomic DNA Mini Kit (Invitrogen). Após a extração, realizamos o método de qPCR-HRM. Com a análise das 6 cepas de N. gonorrhoeae de referência para a determinação da Tm da espécie, foi estabelecida a Tm para detecção de gonococo em 81,71ºC com uma faixa de variação de ±0,5ºC. Foram analisadas 8 amostras suspeitas de N. gonorrhoeae e sete apresentaram Tm compatível com a definida para a espécie. Uma cepa com Tm fora do valor de referência, deverá ser submetida a novo teste. Na análise investigativa para Sneathia amnii em algumas amostras clínicas de IST disponíveis no laboratório, foram selecionadas 5 amostras de material clínico de IST já com DNA extraído e iniciamos a PCR do gene ribossomal 16S. Posteriormente foi realizado a purificação dos produtos da PCR e por fim, o sequenciamento. No sequenciamento não obtivemos resultado confirmatório para Sneathia amnii. Foi descartado a hipótese do material clínico recebido, suspeito de ser Sneathia amnii, e nos outros cinco materiais clínicos de IST, cedidos pelo LMR. Os resultados mostram a possibilidade de se utilizar um método sensível e específico com menor custo para o diagnóstico de N. gonorrhoeae. Em relação à Sneathia spp. é necessária uma investigação profunda com a detecção da espécie entre as amostras clínicas, pois por ser um microrganismo fastidioso de difícil cultivo, pode não estar sendo detectado com grande risco para os pacientes.
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