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https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/50986
AVALIAÇÃO DA SENSIBILIDADE DA TÉCNICA DE IMUNO-HISTOQUÍMICA USANDO CELL-BLOCK DE ASPIRADOS DE MEDULA ÓSSEA PARA DETECÇÃO DE LEISHMANIA SPP. EM CÃES NATURALMENTE INFECTADOS
Leishmania infantum
Cães
Cell-block
Imunohistoquímica.
Medula óssea
Leishmania infantum
Dogs
Cell-block
Immunohistochemistry
Bone marrow
Rosa, Amanda Cardozo da | Date Issued:
2020
Author
Advisor
Affilliation
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Abstract in Portuguese
A leishmaniose visceral zoonótica (LVZ) é uma doença de ampla distribuição no Brasil causada pelo protozoário Leishmania infantum, que acomete humanos, animais domésticos e silvestres. O cão (Canis familiaris) é considerado o principal reservatório doméstico desse protozoário. Nos últimos anos, têm sido verificados novos casos de LVZ em cães de diversas áreas, onde não existiam registros da doença. Nesse sentido, a busca por técnicas de diagnóstico mais sensíveis e específicas com aplicação a campo, bem como de amostras biológicas com elevada carga parasitária, a exemplo da medula óssea, é fundamental para um diagnóstico prático, seguro e eficiente. Desta forma, o emprego da técnica de imuno-histoquímica usando cell-block de aspirados de medula óssea (IHQCB) mostra-se uma alternativa promissora, cuja sensibilidade deve ser avaliada. Portanto, os objetivos desse estudo foram avaliar a sensibilidade da técnica de IHQCB e a sensibilidade da técnica de imuno-histoquímica em amostras de medula óssea de fragmento do osso esterno (IHQOE), usando como padrão de referência a técnica de cultura parasitológica (CP). Foi incluída no estudo uma amostra de conveniência de 84 cães, provenientes do município de Barra Mansa entre 2013 e 2019, soropositivos para L. infantum e com confirmação da infecção por esse parasito em CP de pele, baço, medula óssea ou linfonodo Os resultados mostraram que a técnica de IHQOE detectou formas amastigotas em casos negativos de CP de medula óssea e a sua frequência de positividade de 65,5% (IC=95%: 54,2%; 75,3%) em relação à CP de pele, baço, linfonodo ou medula óssea, foi superior à frequência de positividade de 31% (IC=95%, 21,6%; 42,1%) da técnica de IHQCB na detecção de formas amastigotas de L. infantum. As frequências de positividade para a IHQCB, na presença ou ausência de sinais clínicos, foram 29,7% e 40,0%, respectivamente, tendo a positividade da CP de medula óssea, pele, linfonodo ou baço como referência. Já para as amostras de fragmento de osso esterno, 58,3% foram positivas na presença de sinais clínicos, enquanto 60,0% das amostras foram positivas na ausência de sinais clínicos. Desta forma, apesar de possuir potencial de utilização como técnica parasitológica de rotina no diagnóstico da infecção por L. infantum em cães pela praticidade na coleta e preservação da amostra, a técnica de IHQCB apresentou uma baixa sensibilidade na detecção de formas amastigotas de Leishmania spp. e necessita de ajustes em seu protocolo
Abstract
A Zoonotic visceral leishmaniasis (LVZ) is a disease of wide distribution in Brazil caused by the protozoan Leishmania infantum, which affects humans, domestic and wild animals. The dog (Canis familiaris) is considered the main domestic reservoir of this protozoan. In recent years, new cases of LVZ have been observed in dogs from different areas, where there were no records of the disease. Thus, the search for more sensitive and specific diagnostic techniques with application in the field, as well as biological samples with high parasitic load, such as bone marrow, is essential for a practical, safe and efficient diagnosis. Thereby, the use of immunohistochemistry using cell-block of bone marrow aspirates (IHCCB) is a promising alternative, whose sensitivity must be evaluated. Therefore, the objectives of this study were to evaluate the sensitivity of the IHCCB and the sensitivity in bone marrow samples from a fragment of the sternum bone (IHCSB), using the parasitological culture (PC) technique as a reference standard. A convenience sample of 84 dogs from the municipality of Barra Mansa between 2013 and 2019, serologically positive for L. infantum and with confirmation of the infection by this parasite in PC of skin, spleen, bone marrow or lymph node was included in the study The results showed that the IHCSB detected amastigotes forms in negative cases of bone marrow PC and its frequency of positivity of 65.5% (CI = 95%, 54.2%; 75.3%) in relation to culture parasitological analysis of skin, spleen, lymph node or bone marrow, was superior to the frequency of 31% (CI = 95%, 21.6% to 42.1%) of positivity using IHCCB in the detection of amastigotes forms. The frequencies of positivity for IHCCB, in the presence or absence of clinical signs, were 29.7% and 40.0%, respectively, with the positivity of the PC of bone marrow, skin, lymph node or spleen as reference. For the samples of the sternal bone fragment, 58.3% were positive in the presence of clinical signs, while 60.0% of the samples were positive in the absence of clinical signs. Thus, despite having potential for use as a routine parasitological technique in the diagnosis of infection by L. infantum in dogs due to the practicality in collecting and preserving the sample, the IHCCB technique showed a low sensitivity in the detection of amastigote forms of Leishmania spp. and needs adjustments to its protocol
Keywords in Portuguese
Leishmaniose visceralLeishmania infantum
Cães
Cell-block
Imunohistoquímica.
Medula óssea
Keywords
Visceral leishmaniasisLeishmania infantum
Dogs
Cell-block
Immunohistochemistry
Bone marrow
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