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https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/47980
VALIDAÇÃO DO MÉTODO DE DETERMINAÇÃO DO TEOR DE ÁCIDO ASCÓRBICO EM BAIXAS CONCENTRAÇÕES
Lisboa, Fabiane Rangel Weck | Date Issued:
2013
Author
Advisor
Comittee Member
Affilliation
Fundação Oswaldo Cruz. Instituto de Tecnologia em Fármacos. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.
Abstract in Portuguese
O objetivo deste trabalho foi demonstrar que o método analítico em questão é apropriado para a determinação do teor do ácido ascórbico em baixas concentrações. A metodologia pode ser aplicada para analisar resíduos no fármaco em equipamentos de produção (validação de limpeza) e/ou análises em que o fármaco esteja presente como excipiente ou em baixas concentrações. A validação foi realizada seguindo os parâmetros preconizados pela RE nº899/03, da ANVISA tais como: especificidade, linearidade, precisão, exatidão, limite de detecção, limite de quantificação, intervalo e robustez. O estudo de validação é importante porque evidencia que um método é adequado e confiável para o uso pretendido. O método analítico empregou-se a técnica por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), com o uso de uma coluna de fase reversa Hypersil C18 (250 x 4,6 mm, 5\03BCm) em uma temperatura de 30º C, com um fluxo de 1,0 mL/min em um comprimento de onda 260 nm com um volume de injeção de 20 \03BCL e tempo de corrida de 30 minutos. A fase utilizada foi composta de uma solução de fosfato de potássio monobásico 6,8 g/L: Acetonitrila (250:750). A solução de tiossulfato de sódio foi utilizada como diluente para propiciar maior estabilidade das soluções analíticas. De acordo com os resultados dos parâmetros avaliados, todos os critérios de aceitação foram atendidos e deste modo à metodologia se mostrou apropriada para quantificar o ácido ascórbico no intervalo de 0,08 \03BCg/mL (limite de quantificação) a 3,2 \03BCg/mL de ácido ascórbico.
Abstract
This study aimed to demonstrate that the proposed analytical method is suitable to quantify ascorbic acid in low concentrations. The main application of this methodology is drug residues analyses in manufacturing equipment (cleaning validation) whether it is the active pharmaceutical ingredient or just an excipient. Validation was performed according to parameters (RE no 899/03 of ANVISA) such as: selectivity, linearity, precision, accuracy, detection limit, quantification limit, interval and robustness since the validation study is important because showed that the method is suitable and reliable. High Performance Liquid Chromatography (HPLC) was used and employed a Hypersil a C18 reverse-phase column (250 x 4,6 mm, 5 \03BCm), 30oC temperature, 1,0 mL/min flow, 260 nm wavelength, 20 \03BCL injection volume, and 30 minutes stop time. The Mobil phase used was 6.8 g/L of monopotassium phosphate : acetonitrile (250:750). Sodium thiosulfate was employed to maintain solution stability. Results show that the assessed tests meet all acceptance criteria in the concentration range between 0.08 \03BCg/mL (quantification limit) and 3.2 \03BCg/mL of ascorbic acid.
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